| 目錄號 | MS8013-100T | 售價(jià) | 558.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 100T | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱(chēng) | 保存溫度 | -20℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS號 | N/A | 有效期 | 6個(gè)月 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 訂購數量 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
產(chǎn)品簡(jiǎn)介: Reduced Glutathione Assay Kit 還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品描述 谷胱甘肽（Glutathione, Glutathione）是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的一種三肽。是最小的細胞內蛋白巰基分子，能夠預防活性氧比如自由基和過(guò)氧化物引起的細胞損傷。谷胱甘肽以還原型（GSH）和氧化型（GSSG）兩種狀態(tài)存在。還原型谷胱甘肽（GSH）是主要的組織抗氧化劑，為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）催化脂質(zhì)氫過(guò)氧化物還原生成醇化合物和過(guò)氧化氫生成水提供還原當量物。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）催化反應中，兩個(gè)GSH之間二硫鍵的形成使生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。而谷胱甘肽還原酶（GR）同時(shí)在β-NADPH2的氧化下將GSSG再循環(huán)生成GSH。當細胞暴露于逐漸提高的氧化應激下，GSSG累積，引起GSSG/GSH水平增加。GSSG/GSH增加程度可用作氧化應激水平的指示劑。因此，監測生物樣本內GSH和GSSG的水平至關(guān)重要，能夠用于評估細胞和組織應對氧化應激和自由基介導的細胞損傷上的氧化還原和解毒狀態(tài)。 本還原型谷胱甘肽檢測試劑盒（Reduced Glutathione Assay Kit, GSH Assay Kit）是一款簡(jiǎn)單便捷的還原型谷胱甘肽測定試劑盒，檢測原理是：待測樣本內的還原型谷胱甘肽（GSH）與二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成穩定的黃色的TNB和GSSG，通過(guò)酶標儀測定410nm處的吸光度，并且與相應處理的GSH標準做比較，得到樣品中的GSH含量。本試劑盒適用于測定血漿、血清、動(dòng)植物組織、細胞等樣本內的GSH含量。 試劑盒組分
保存與運輸方法 保存：-20℃保存，6個(gè)月穩定。推薦根據各組分的保存方法歸位保存。 運輸：冰袋運輸。 注意事項 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。 使用方法 1. 試劑準備 1.1 配制 GSH 標準儲存液 將低溫保存的還原型谷胱甘肽標準（GSH Standard）回溫至室溫。往10mg 還原型谷胱甘肽標準加入3.25ml ddH2O，溶解并混勻，即得到：還原型 GSH 標準儲存液（10mM）。一部分立即使用，剩下的請根據單次用量適當分裝后，-20℃保存，避免反復凍融。 1.2 配制 DTNB儲存液 往10mg DTNB 中加入1ml DMSO，溶解并混勻，即得到：DTNB 儲存液（10mg/ml）。一部分立即使用，剩下的請根據單次用量適當分裝后，-20℃保存，避免反復凍融。 1.3 配制 GSH檢測工作液：按下表配制本工作液。
1.4 配制蛋白沉淀工作液 往2.5g 蛋白沉淀劑中加入 50ml ddH2O，配制成 50ml 5%的水溶液，即得到：蛋白沉淀工作液，置于4℃保存。 1.5 配制標準品 把還原型 GSH 標準儲存液（10mM）用蛋白沉淀工作液稀釋成 50μM 標準溶液，然后依次稀釋成 25、 15、 10、5、2μM GSH 溶液，取 50、 25、 15、 10、 5、 2μM GSH 標準溶液 6 個(gè)點(diǎn)做標準曲線(xiàn)?！咀⒁猓河捎?GSH 標準在蛋白沉淀工作液中不是很穩定，用蛋白沉淀工作液配制的 GSH 溶液必須新鮮配制，不可凍存后再使用?！?/span> 1.6配制 NADPH 工作液 往10mg NADPH 中加入 1ml ddH2O，溶解并混勻，即得到：NADPH 儲存液（10mg/ml）。一部分立即使用，剩下的請根據單次用量適當分裝后，-20℃保存，避免反復凍融。按 0.1ml NADPH 儲存液（10mg/ml）加入 8.23ml GSH assay buffer的比例加量，充分混勻，即得到：NADPH 工作液（0.12mg/ml）。 2. 樣本準備 2.1 紅細胞或血漿樣品 取新鮮血液，600g離心10min，沉淀為紅細胞，上清為血漿。對于紅細胞，用 PBS 洗滌兩次，取約 50μl 紅細胞沉淀或血漿，加入50μl 蛋白沉淀工作液，充分渦旋振勻。4℃或冰浴放置10min， 4℃ 10000g 離心10min，取上清，用于GSH測定，樣品需暫時(shí)4℃保存備用，不立即測定的樣品可以-70℃保存，但不宜超過(guò)10天。對于處理好的紅細胞樣品最后需用蛋白沉淀工作液稀釋 10倍后再進(jìn)行后續的測定，而對于血漿樣品，應直接取10μl 進(jìn)行測定。 2.2 動(dòng)植物組織樣品 取組織用液氮速凍，迅速研磨，按每40mg加入100μl 蛋白沉淀工作液（亦可不用液氮，而是直接加入蛋白沉淀工作液至組織后勻漿或研磨），充分渦旋振勻，再加入300μl 蛋白沉淀工作液，用勻漿器充分勻漿。4℃孵育 10min，4℃ 10000g離心10min，取上清，用于GSH測定。樣品需暫時(shí) 4℃保存備用，不立即測定的樣品可以-70℃保存，但不宜超過(guò)10 天。對于處理好的組織樣品通常需用蛋白沉淀工作液進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行測定，稀釋倍數通常為 5-20倍。 2.3 細胞樣品 PBS洗滌細胞1次，離心收集細胞，吸盡上清，加入細胞沉淀 3倍體積的蛋白沉淀工作液，充分渦旋振勻（收集細胞前后分別對離心管進(jìn)行稱(chēng)重，從而就可以計算出細胞沉淀的重量，10mg細胞沉淀的體積可以粗略看做10ml）。對樣品進(jìn)行快速的凍融后， 4℃或冰上孵育5min，4℃ 10000g 離心10min，取上清，用于 GSH測定。樣品需暫時(shí)4℃保存備用，不立即測定的樣品可以-70℃保存，但不宜超過(guò)10天。對于處理好的細胞樣品通常需用蛋白沉淀工作液進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行測定，稀釋倍數通常為 5-20 倍。 3. GSH加樣 取 96 孔板，按照下表設置空白孔、標準孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的GSH 濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進(jìn)行測定。
4. GSH檢測 立即用酶標儀或自動(dòng)生化分析儀測定 410nm處吸光度，每隔 2min 檢測 1次，空白孔調零，共檢測 6min（亦可加入 NADPH 工作液反應 6min 后檢測，只檢測 1次），以檢測其反應速率ΔA/min。如果酶標儀不能檢測 410nm，可測定 405-420nm處吸光度。 相關(guān)產(chǎn)品
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
