目錄號 | MP7501-100T | 售價(jià) | 562.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 100T | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱(chēng) | Alkaline Phosphatase Activity Assay Kit 堿性磷酸酶活性檢測試劑盒 | 保存溫度 | -20℃凍存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS號 | N/A | 有效期 | 1年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | ALP活性(定量) | 訂購數量 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介: Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 堿性磷酸酶檢測試劑盒(顯色法)
產(chǎn)品標簽: Phosphatase, Alkaline堿性磷酸酶;ALP/AKP;對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP);偶氮偶聯(lián)法;顯色法(定量);染色法(定性);
產(chǎn)品信息
【溫馨提示I】:見(jiàn)堿性磷酸酶產(chǎn)品專(zhuān)題,了解更多相關(guān)產(chǎn)品資料; 【溫馨提示II】:見(jiàn)堿性磷酸酶染色試劑盒產(chǎn)品; 【溫馨提示III】:見(jiàn)堿性磷酸酶活性檢測試劑盒產(chǎn)品專(zhuān)題; 【溫馨提示IV】:見(jiàn)堿性磷酸酶常用生化底物及試劑盒產(chǎn)品;
產(chǎn)品描述 堿性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase,EC 3.1.3.1),堿性條件下能催化磷酸單酯水解,常見(jiàn)底物有對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)、磷酸苯酯、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸等。常見(jiàn)ALP包括腸道堿性磷酸酶(如小牛腸來(lái)源,calf intestinal)、胎盤(pán)堿性磷酸酶(placental alkaline phosphatase)、非組織特異性堿性磷酸酶(tissue-nonspecific isozyme, alkaline phosphatase)等。堿性磷酸酶(ALP)活性的變化與一系列生理和病理事件緊密關(guān)聯(lián),比如骨骼發(fā)育、骨骼相關(guān)疾病、妊娠相關(guān)疾病和炎癥性腸?。╥nflammatory bowel diseases)等。正因如此,ALP被用作衡量生理特征或疾病的參照指標。另外,ALP活性檢測在環(huán)境監測、食品質(zhì)量控制等方面也呈現重要作用。如,干細胞如誘導多潛能干細胞iPS,ALP活性很高,則ALP常被用作iPS誘導成功的標志;分化的結腸癌細胞內ALP活性顯著(zhù)提高,則ALP常被當做結腸癌細胞分化程度的指標(定性/定量);血清中ALP水平提高,被稱(chēng)作高堿性磷酸酶血癥,此癥狀被認為和惡性膽管阻塞、原發(fā)性膽管硬化、原發(fā)性硬化膽管炎、肝淋巴瘤和肝肉瘤等肝膽疾病密切相關(guān);ALP是成骨細胞的副產(chǎn)物,血清中ALP活性升高和骨頭發(fā)育密切關(guān)聯(lián); 本試劑盒能對細胞或組織裂解液或勻漿液、血清、血漿、尿液等樣品內源性堿性磷酸酶活性進(jìn)行檢測。原理在于:對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)是一種常用的堿性磷酸酶(ALP)顯色底物,堿性條件下能被ALP催化生成對硝基酚(para-nitrophenol,p-nitrophenol),呈黃色產(chǎn)物,可在400-415nm檢測到吸光度。產(chǎn)物黃色越深,代表ALP活性越高,反之則酶活性越低。則通過(guò)比色分析可定量檢測ALP水平。 本試劑盒可檢測100個(gè)樣品,包括標準品和空白對照。
產(chǎn)品組成
保存與運輸方法 保存:-20℃凍存,1年穩定。 運輸:冰袋運輸。
注意事項 1. 若希望進(jìn)行酶活力的絕對定量,進(jìn)行酶反應時(shí)必須注意精確計時(shí)。此時(shí)推薦孵育30min等較長(cháng)時(shí)間,以減小操作過(guò)程中的時(shí)間誤差。若樣品中酶活性較高,則可預先適當稀釋樣品。 2. 樣品溶液中須避免出現EDTA、氟離子、檸檬酸鹽等堿性磷酸酶抑制劑。 3. 檢測緩沖液和對硝基苯酚標準品對人體有害,請注意適當防護。反應終止液有腐蝕性,請小心操作。 4. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
操作步驟 1. 試劑準備:將所有試劑取出,恢復至室溫待用。 a) 顯色底物溶液:取一管顯色底物,溶解于2.5ml的檢測緩沖液中,充分溶解和混勻,冰上放置。新鮮配制的顯色底物溶液需在數小時(shí)(≤ 6h)內使用。 b) 標準品工作液:取10μl 對硝基苯酚標準品(10mM),用檢測緩沖液稀釋至200μl ,使得終濃度為0.5mM。
2. 樣品準備 a) 細胞或組織裂解液的準備:采用適當細胞或組織裂解液裂解細胞和組織,如有必要需進(jìn)行適當勻漿,隨后離心取上清,用于A(yíng)LP活性檢測?!咀⒁狻浚毫呀庖褐胁荒芎姿崦敢种苿?。樣品可-80℃凍存,避免反復凍融。 b) 血漿、血清和尿液的準備:血漿和血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,但為了消除樣品本身顏色的干擾,需設置加了血漿或血清但不加底物的對照?!咀⒁狻浚貉獫{制備不能用含EDTA和檸檬酸鹽的抗凝管。尿液通常也可直接用于測定。上述樣品可-80℃凍存,避免反復凍融。 c) 樣品的稀釋?zhuān)喝魳悠分泻休^高的ALP活性,可以使用原有的裂解液或PBS等進(jìn)行稀釋?zhuān)部梢杂?/span>試劑盒中的檢測緩沖液進(jìn)行稀釋。若使用試劑盒內的檢測緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)枳⒁獗A糇銐虻木彌_液用于該試劑盒的檢測過(guò)程。
3.加樣 參考下表使用96孔板設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、24、32和 40μl,樣品通??梢灾苯蛹?0μl。如果樣品中的ALP活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進(jìn)行測定。
4. 混勻:用槍頭輕輕吹打混勻,也可借助搖床進(jìn)行混勻。 6. 終止:每孔加入100μl反應終止液終止反應。此時(shí),標準品或有ALP活性的孔會(huì )呈現不同深淺的黃色。 7. 檢測:405nm處測定吸光度。如果不能測定405nm,也可以在400-415nm范圍內檢測吸光度。如果不能立即測定,可以在數小時(shí)內完成測定,所顯現的黃色在數小時(shí)內穩定。 8. 單位定義: 堿性磷酸酶活性單位的定義:在pH9.8的二乙醇胺(DEA)緩沖液中,37℃條件下,每min水解pNPP顯色底物產(chǎn)生1μM對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定義為一個(gè)酶活力單位,也被稱(chēng)作一個(gè)DEA酶活力單位。在pH9.6的甘氨酸緩沖液中,25℃條件下,每min水解pNPP顯色底物產(chǎn)生1μM對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定義為一個(gè)酶活力單位,也被稱(chēng)作一個(gè)甘氨酸酶活力單位。一個(gè)甘氨酸酶活力單位約相當于3個(gè)DEA酶活力單位。本試劑盒測定的是DEA酶活力單位。 9. 結果分析:根據酶活性單位的定義,計算出樣品中的堿性磷酸酶活性。
常見(jiàn)問(wèn)題 1. 說(shuō)明書(shū)提及配制好的顯色底物溶液需在6小時(shí)內使用完。試劑盒只提供了兩管顯色底物,是不是意味 著(zhù)只能做兩次? 回答:是的。顯色底物以粉末形式提供,單次實(shí)驗需取一管全部配成顯色底物溶液,且需要在6小時(shí)內用完,不建議凍存后再使用。為了避免試劑盒浪費,請在累積足夠的樣本后再進(jìn)行檢測。
2. 本試劑盒適用于細胞培養上清內堿性磷酸酶的檢測嗎? 回答:不可以。本試劑盒常用于細胞裂解液的檢測,不適合細胞培養上清的檢測,因為上清內的酶量偏低,不足以被本試劑盒檢測到,無(wú)法反映真實(shí)結果。
3. 本試劑盒內提及合適的細胞和組織裂解液,有沒(méi)有推薦的? 回答:推薦使用我司的免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)(Cat#: MP1508-100ML)?;蜃孕信渲坪?.2% Triton X-100的PBS,TBS或生理鹽水等適當溶液。裂解液內不能含任何磷酸酶抑制劑。
4. 本試劑盒內的堿性磷酸酶活性如何計算所得? 回答:根據標準曲線(xiàn)和待測樣品的吸光值,可計算到樣品中對硝基苯酚(p-Nitrophenol)生成量。再根據酶活性定義:將生成的對硝基苯酚摩爾量除以孵育時(shí)間,進(jìn)行酶活計算。制作標準曲線(xiàn)時(shí),可以將橫坐標體積轉換算成摩爾數,再繪制標準曲線(xiàn),方便后續計算。根據標準曲線(xiàn)方程計算出生成的對硝基苯酚摩爾量除以37℃孵育的時(shí)間即得到酶活。
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文獻引用: Wang CH et al. Colorimetric logic gate for alkaline phosphatase based on copper (II)-based metal-organic frameworks with peroxidase-like activity. Analytica Chimica Acta Volume 1004, 3 April 2018, Pages 74-81
Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit using p-nitrophenyl phosphate (pNPP) as aphosphatase substrate was purchased from MKbio Co. Ltd. (Shanghai, China).
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