表1. 膠原酶NB系列產(chǎn)品選擇指南

Collagenase NB 1 Premium Grade

Collagenase NB 4 Standard Grade

Collagenase NB 4G Proved Grade

Collagenase NB 5 Sterile Grade

Collagenase NB 8 Broad Range

縮寫(xiě)

NB 1

NB 4

NB 4G

NB 5

NB 8

貨號

17455

17454

17465

17459

17456

簡(jiǎn)單描述

高度純化膠原酶，含膠原酶Class I和Class II型，以及非常低的蛋白裂解酶次活性和細菌內毒素。

粗制酶，含膠原酶Class I和Class II型，以及平衡比的蛋白水解酶次活性比如中性蛋白酶或梭菌蛋白酶。

粗制酶，與膠原酶NB 4標準級別相比，具有更高的膠原酶活性，具有更平衡的中性蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶樣活性。

粗制酶，含與膠原酶NB 4標準級別相同的酶活性。不同之處在于根據歐洲藥典EP規定的無(wú)菌條件下生產(chǎn)。

純化膠原酶，含有增加的膠原酶活性和減低的蛋白水解酶次活性和細菌內毒素。

純化程度

親和高度純化酶

粗制酶

粗制酶

粗制酶

純化酶

膠原酶活性

++++

+

++

+

+++

蛋白裂解次活性

-

++

+++

+++

+

無(wú)菌程度

非無(wú)菌

非無(wú)菌

非無(wú)菌

無(wú)菌

非無(wú)菌

比活力

≥3.00 U/mg

≥0.10 U/mg

≥0.18 U/mg

≥0.10 U/mg

≥0.90 U/mg

內毒素

≤10.0 EU/mg

/

/

/

≤100 EU/mg

主要應用

用于分離敏感細胞并保證高產(chǎn)量和高活性。與中性蛋白酶NB聯(lián)合使用，特別適用于不同物種如人或豬來(lái)源的郎格罕氏島（胰島）分離。

適用于溫和和有效分離各種來(lái)源的細胞。比如，分離人和嚙齒類(lèi)動(dòng)物肝細胞，軟骨細胞，神經(jīng)和內皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，干細胞和嚙齒類(lèi)動(dòng)物成骨細胞。

適用于廣譜的細胞類(lèi)型分離，特別是成纖維細胞、人和嚙齒類(lèi)動(dòng)物肝細胞、青蛙卵母細胞和上皮細胞。

適用于溫和和有效分離各種來(lái)源的細胞。比如，分離人和嚙齒類(lèi)動(dòng)物肝細胞，軟骨細胞，神經(jīng)和內皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，干細胞和嚙齒類(lèi)動(dòng)物成骨細胞。

適用于廣泛來(lái)源組織的消化用途比如嚙齒類(lèi)動(dòng)物的郎格罕氏島（胰島）分離，人心肌細胞，腫瘤細胞，肌肉細胞，成骨細胞和豬肝臟細胞。

基本描述

粗制酶，含膠原酶Class I和Class II型，以及平衡比的蛋白水解酶次活性比如中性蛋白酶或梭菌蛋白酶。

同義名

Collagenase NB 4 Standard Grade from Clostridium histolyticum; Clostridiopeptidase A;

EC NO.

EC 3.4.24.3

CAS NO.

9001-12-1

分子量

Mr ca. 70 000 - 120 000 (collagenases)

活力

PZ activity (Wünsch):≥0.10 U/mg

單位定義

1 U according to Wünsch (2) catalyzes the hydrolysis of 1 μmole 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-leucylglycyl-L-prolyl-D-arginine per minute at 25 °C, pH 7.1.

應用

適用于溫和和有效分離各種來(lái)源的細胞。比如，分離人和嚙齒類(lèi)動(dòng)物肝細胞，軟骨細胞，神經(jīng)和內皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，干細胞和嚙齒類(lèi)動(dòng)物成骨細胞。

Suitable for different applications in tissue dissociation such as isolation of human and rodent hepatocytes, chondrocytes, neuronal and endothelial cells, fibroblasts, cells from adipose tissue (e.g. ADSCs), stem cells and rodent osteoblasts.

品牌              

名稱(chēng)

貨號                   

規格                  

SERVA

Collagenase NB 4 Standard Grade 膠原酶NB 4（標準級別）      

17454.02

500mg

SERVA

Collagenase NB 4 Standard Grade 膠原酶NB 4（標準級別）

17454.01

1g

問(wèn)：膠原酶NB（Collagenase NB）和中性蛋白酶NB（Neutral Protease NB）的來(lái)源是什么？

答：SERVA公司所有膠原酶NB和中性蛋白酶NB產(chǎn)品都來(lái)源自溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），其是一種厭氧、革蘭氏陽(yáng)性菌，天然代謝產(chǎn)生膠原酶和中性蛋白酶。

問(wèn)：為什么膠原酶NB1和中性蛋白酶NB根據活力值來(lái)包裝，而所有其他膠原酶NB產(chǎn)品按照質(zhì)量來(lái)包裝？

答：膠原酶NB1和中性蛋白酶NB特別適合用來(lái)分離人胰腺來(lái)源的郎格罕氏島（胰島），這些酶的包裝大小特別設計用于消化一個(gè)人胰腺。而其他膠原酶NB產(chǎn)品適合各種應用所以很難確定特定包裝大小。

問(wèn)：如何保存膠原酶NB和中性蛋白酶NB？

答：SERVA公司膠原酶NB和中性蛋白酶NB產(chǎn)品以?xún)龈煞坌问教峁?，應置?-8℃干燥保存（除非COA上特別說(shuō)明）。在此條件下，產(chǎn)品在COA上注明的有效日期前都是穩定的。避免重復的開(kāi)/關(guān)瓶子。

問(wèn)：是否應該重溶膠原酶NB和分裝儲存液或每次按需稱(chēng)取凍干粉產(chǎn)品？

答：SERVA公司推薦制備儲存液，通過(guò)將膠原酶NB溶解在適當體積的緩沖液，如HBSS，PBS，Tris或Ringer溶液中。重溶儲存液需過(guò)濾除菌（如果產(chǎn)品本身非無(wú)菌），分裝，凍存在-20℃。內部穩定性測試顯示如此條件下能保存1年，避免重復凍融。

如果凍干粉產(chǎn)品的瓶子開(kāi)關(guān)數次，會(huì )使得粉末酶接觸空氣濕氣，可能引起酶活性降低。

問(wèn)：是否可以過(guò)濾膠原酶NB和中性蛋白酶NB溶液？

答：是的，這些溶液都能經(jīng)0.22μm濾膜除菌。建議使用低蛋白結合特性的濾器（濾膜），比如醋酸纖維素膜，PVDF或PES。

問(wèn)：加酶到細胞之前如何保存膠原酶溶液？

答：膠原酶NB和中性蛋白酶NB溶液需要持續性保存在冰上直至使用，因保存在更高溫度時(shí)酶活力降低很明顯?？偠灾?，盡快使用酶溶液。

問(wèn)：膠原酶NB和中性蛋白酶的最佳工作溫度和最佳pH？

答：膠原酶NB的最佳工作溫度37℃，最佳pH=7.4；中性蛋白酶的最佳溫度37℃，中性pH皆可；

問(wèn)：是否能提供關(guān)于細胞分離應用的操作步驟？

答：SERVA膠原酶NB應用范圍非常廣，且使用實(shí)驗室非常多。SERVA提供應用注意事項和關(guān)于各種組織來(lái)源的細胞分離所用的膠原酶濃度和消化時(shí)間的步驟信息。見(jiàn)官網(wǎng)：Application details for tissue dissociation。

問(wèn)：哪種緩沖液應用于細胞分離？

答：不推薦使用特別的緩沖液，因已知幾種緩沖液，包括HBSS，PBS和Tris都適用于膠原酶的細胞分離。膠原酶依賴(lài)Ca2+，因此推薦緩沖液含≥2mM Ca2+。EDTA會(huì )抑制膠原酶活性，因此緩沖液中必須完全不含鈣離子螯合劑比如EDTA。

問(wèn)：如何終止酶的消化反應？

答：通過(guò)降低溫度、添加人或胎牛血清，稀釋或清洗掉消化液都能終止消化反應。沒(méi)有特別推薦因幾種方法都有效，還是取決于組織和細胞類(lèi)型和具體應用。

問(wèn)：如何換算膠原酶單位？

答：SERVA states collagenase activity in PZ units according to Wünsch:1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg，1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl or CDU/mg，1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg

更多產(chǎn)品問(wèn)題請自行登錄SERVA官網(wǎng)或來(lái)電索取，021-54736159，QQ：2971634497。