目錄號 | MF0402-10MG | 售價(jià) | 250.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 10mg | 運輸溫度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱(chēng) | Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脫氧核糖核酸酶A | 保存溫度 | -20°C干燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS號 | 9003-98-9 | 有效期 | 3年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 去除蛋白或RNA樣品中的DNA | 訂購數量 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介: DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein 脫氧核糖核酸酶I (DNase I),來(lái)源于牛胰腺
關(guān)鍵詞: Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9
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產(chǎn)品描述 脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫(xiě)DNase I,在大多數細胞和組織中都能發(fā)現的一種核酸內切酶,偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵,產(chǎn)生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸,平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下,DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn);而在Mn2+存在條件下,DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA,如單鏈DNA、雙鏈DNA,甚至染色質(zhì)(其切割速率受組蛋白影響)。
脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫(xiě)DNase I,最早從胰腺中分離而來(lái),至今哺乳動(dòng)物胰腺也是最主要的來(lái)源之一。DNase I以?xún)蓪Χ蜴I結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8,DNase的活性依賴(lài)于Ca2+,并可被二價(jià)金屬離子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來(lái)的1/2。
本品來(lái)自牛胰腺,親和色譜純化制備所得,常用于去除蛋白或RNA樣品中的DNA,或者用于向DNA中引入缺口使標記堿基插入DNA。本品以?xún)龈煞坌问焦?,比活?00 Kunit Units/mg蛋白。
產(chǎn)品特性 1) CAS NO:9003-98-9 2) 分子量:~31 kDa 3) 同義名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脫氧核糖核酸酶A 4) 比活力:≥500 Kunit Units/mg protein 5) 活力定義:在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反應緩沖體系中,37℃,10min內完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即為一個(gè)活力單位。此反應條件下得到的一個(gè)單位DNase活力約等于一個(gè)Kuntiz unit。 6) 激活劑:多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+ 7) 抑制劑:EGTA,EDTA,鹽離子濃度(>100mM)都能降低DNase活性 8) 熱失活:含終止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)內65℃,處理10min 9) 溶解性:溶于緩沖液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)
保存與運輸方法 保存:凍干粉-20℃干燥凍存,至少3年穩定。 運輸:冰袋運輸。
使用方法 一、 儲存液制備 將低溫保存的本品置于室溫回溫至少20min,低速短時(shí)離心后,加入適量緩沖液配制成至少≥1mg/ml儲存液(如:20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油),根據一定用量分裝置于-20℃保存,至少1年穩定。
二、 反應緩沖液制備 建議1×反應緩沖液:40mM Tris-HCl(pH 8.0), 2.5mM (up to 10mM) MgSO4,1mM (up to 10mM) CaCl2 【注意】:當起始原料含EGTA,EDTA,其他螯合劑,和/或高濃度鹽離子,此時(shí)反應緩沖液需更高濃度的Mg2+和Ca2+。
三、使用步驟(作為參考,具體實(shí)驗可做適當調整) 2.1 往一個(gè)RNase-free PCR管內加入:1μg RNA樣本;49 μl 1×反應緩沖液;1 μl DNase I, 1 unit/ml;【注意:酶的實(shí)際比活力請見(jiàn)產(chǎn)品標簽】,混勻。 2.2 37℃孵育10-15min?!咀⒁猓合瘯r(shí)間不要超過(guò)15min或消化溫度不要高于37℃,否則殘留的RNase A污染可能會(huì )開(kāi)始降解RNA】 2.3 加入1μl終止液(20mM EGTA,pH 8.0)結合Ca2+和Mg2+,之后于65-70℃失活10min,終止反應?!咀⒁猓罕仨氃跓崾Щ钪凹尤虢K止液】
注意事項 1) 在不同的反應緩沖體系內,用來(lái)完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同,請根據具體的工作體系或實(shí)驗經(jīng)驗來(lái)決定?!咀⒁猓蝴}濃度>100mM會(huì )降低DNase I活性】 2) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
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注意事項 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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