Peroxidase (POD), Grade II，from horseradish

（辣根過(guò)氧化物酶 HRP，Grade II）

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Peroxidase from Horseradish 辣根過(guò)氧化物酶；HRP；過(guò)氧化物酶 POD；抗體偶聯(lián)；免疫球蛋白；CAS：9003-99-0；

辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish peroxidase，HRP，EC 1.11.1.7），一種含四個(gè)二硫鍵的單鏈多肽，也是一種由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白，含18% 碳水化合物。碳水化合物的組分包括半乳糖，阿拉伯糖，木糖，海藻糖，甘露糖，甘露糖胺和半乳糖胺，取決于同工酶類(lèi)型。

HRP能快速結合過(guò)氧化氫（H2O2）產(chǎn)生HRP- H2O2復合物，其可氧化大量的氫供體，反應式為：Donor + H2O2→ Oxidized Donor + 2 H2O。過(guò)氧化物酶可氧化各種底物，包括生色底物、化學(xué)發(fā)光底物（魯米諾和異魯米諾）和熒光底物（酪胺，高香草酸和對羥基苯乙酸）。

辣根過(guò)氧化物酶（HRP）普遍用于標記許多不同免疫化學(xué)實(shí)驗用的免疫球蛋白，包括ELISA，免疫印跡，免疫組化。還能通過(guò)幾種不同方法偶聯(lián)到抗體上，有二硫鍵介導的戊二醛交聯(lián)，過(guò)碘酸氧化法；還有氨基和巰基直接介導的交聯(lián)。HRP是最理想的抗體標記酶，因為在三種最受歡迎的標記酶（HRP，β-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶AP）中，HRP不僅分子量最小和最穩定，而且糖基化使HRP產(chǎn)生更低的非特異性結合。

一、POD（Grade II）的應用

POD（Grade II）在許多診斷測試的指示反應中用來(lái)氧化還原性染料，比如，血糖、甘油三酯、乳汁內的血糖測定。也是一種標記酶，用于酶聯(lián)免疫實(shí)驗（EIA）。

二、POD（Grade II）的特性

1）CAS NO：9003-99-0

2）英文同義名：Peroxidase (POD), from horseradish; Horseradish peroxidase; HRP; Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase;

3）中文同義名：辣根過(guò)氧化物酶；過(guò)氧化物酶，來(lái)自辣根；氫供體-過(guò)氧化氫氧化還原酶；

4）分子量：40kDa

5）等電點(diǎn)：7.2

6）速率常數：氫受體【H2O29 x 108 [L x mol-1 x s-1]；methyl peroxide 1.5 x 106 [L x mol-1 x s-1]；ethyl peroxide 3.6 x 106 [L x mol-1 x s-1]】；氫供體【許多】

7）抑制劑：疊氮鈉，氰化物，L-胱氨酸，重鉻酸鹽，亞乙基硫脲，羥胺，硫化物，釩酸鹽，對氨基苯甲酸，Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+, and Pb2+

8）激活劑：氨、吡啶、咪唑（pH>7.0）能加速鄰聯(lián)茴香胺的過(guò)氧化

9）最佳pH：6.0-6.5

10）熱穩定：高達40℃

11）特異性：過(guò)氧化物酶特異性識別氫受體，僅H2O2，甲基和乙基過(guò)氧化物有活性。但是，其不能特異性識別氫供體，許多酚類(lèi)、氨基酚類(lèi)、二胺類(lèi)、白細胞染料、抗壞血酸和幾種氨基酸都能與其反應。

12）外觀(guān)：紅-棕色凍干粉

13）溶解性：溶于水（10mg/ml），透明、紅棕色溶液

14）pH (c=10mg/ml)：6.6-7.6

15）活性：≥200 U/mg lyophilizate

16） 純度值：RZ=2.0~3.5。RZ（Reinheitszahl）代表過(guò)氧化物酶純度值，為溶于去離子水中的酶（0.5–1.0 mg/ml）的吸光度比值A403/A275。

17）污染物：ATPase: ≤0.001；Catalase: ≤0.7；Phosphatase, acidic: ≤0.001；Contaminating oxidases: ≤0.00005；

18）穩定性：2-8℃干燥，2年

酶的性能表現：

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