目錄號 | MF0403-100ML | 售價(jià) | 450.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 100ml | 運輸溫度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱(chēng) | 總RNA提取試劑 | 保存溫度 | 2-8℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS號 | N/A | 有效期 | 至少一年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 總RNA提取 | 訂購數量 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介: TRIzol Reagent 總RNA抽提試劑
點(diǎn)擊丨商城購買(mǎi) 積分領(lǐng)好禮 產(chǎn)品關(guān)鍵詞: TRIzol Reagent;酚氯仿抽提;RNase-free H2O; Total RNA 總RNA提??;RNAlater;Invitrogen 15596026;
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品描述 TRIzol Reagent是一種即用型且操作迅捷的總RNA抽提試劑,適用樣本廣泛,包括人、動(dòng)物、植物、酵母或細菌來(lái)源的細胞和組織樣本。TRIzol Reagent是一種含酚、異硫氰酸胍和其他專(zhuān)利成分的單相溶液,有利于抽提分子量大小不一的各種RNA類(lèi)型。TRIzol Reagent能夠良好的維持RNA完整性,因能高效抑制樣本勻漿過(guò)程中細胞破損和細胞組分溶解時(shí)釋放的RNase活性。TRIzol Reagent能夠同時(shí)處理大量樣本,且以?xún)?yōu)化的方式一步法提取RNA,整個(gè)過(guò)程可在一小時(shí)內完成。
TRIzol Reagent分離的總RNA無(wú)蛋白質(zhì)和DNA污染,適用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A)+篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆等下游實(shí)驗。
保存與運輸方法 保存:2-8℃保存,至少一年有效。 運輸:冰袋運輸。
注意事項 1) 所有離心管、槍頭以及相關(guān)溶液都必須無(wú)RNase污染。對于塑料制品、玻璃和金屬器皿、實(shí)驗儀器等可使用懋康生物的固相RNase清除劑去除RNase(貨號:MF0406-100ML),或者用含0.01% DEPC(貨號:MS5513-10ML)的去離子水浸泡過(guò)夜,之后高壓滅菌、烘干。對于實(shí)驗溶液可使用懋康生物的液相RNase清除劑(貨號:MF0407-1.5ML)來(lái)處理或用DEPC處理水(比如:MF0404-500ML)來(lái)配制。 2) 對新鮮組織或細胞樣本的抽提效果通常優(yōu)于凍存的組織或細胞,由于組織或細胞凍融過(guò)程中可能存在一些RNase釋放出來(lái)并酶切樣品。若是不能及時(shí)抽提RNA,推薦先加入適量TRIzol Reagent,之后裂解樣品后再凍存。 3) TRIzol Reagent含有毒物質(zhì),請在操作過(guò)程中注意好防護工作,戴好手套和護眼罩,避免皮膚接觸。在通風(fēng)櫥內完成操作,避免呼吸道吸入。 4) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法 1. 需要自行準備的材料 水浴鍋或微量恒溫儀(Heat block) 異丙醇 75%乙醇 含0.5% SDS的RNase-free水或RNase-free水或DEPC處理水 【可選】RNase-free的糖原(核酸助沉劑)
2. 樣本要求 【重要】:樣本收集后立即進(jìn)行RNA分離,或樣本收集后立即凍存樣本并保存在-80℃或液氮中直至RNA抽提。
3. 樣本準備與分相 3.1 根據起始材料用TRIzol Reagent裂解和勻漿樣本。 ◇組織樣本 按比例每50~100mg 組織加1ml TRIzol Reagent,之后用合適的方法進(jìn)行勻漿。通常用50~100mg組織即可獲得足量的RNA,滿(mǎn)足絕大多數下游實(shí)驗。加入過(guò)量組織或過(guò)少TRIzol都容易導致RNA提取失敗。 a)對于研缽研磨:將液氮凍存組織,放到研缽中研磨成粉末,之后加入1ml TRIzol,繼續研磨至組織完全裂解【研磨要迅速,最好不要超過(guò)1min】。b)對于玻璃勻漿器勻漿:加入1ml TRIzol上下手動(dòng)勻漿組織10~15次。c)對于機械勻漿器:將組織放入塑料管內,將塑料管置于冰浴燒杯內,加入1ml TRIzol,將分散器頭垂直插入管內與組織直接接觸,設置轉速12,000~20,000 rpm,上下移動(dòng)試管10~20次,直至組織完全打散,無(wú)明顯可見(jiàn)大塊即可。 ◇單層生長(cháng)的細胞 吸盡培養基,之后往35mm培養皿(10cm2)內加入1ml TRIzol Reagent,晃動(dòng)3~5次,再用移液槍上下吹打3~5次,使其充分裂解?!景凑?0cm2培養面積加入1ml TRIzol加量。比如:六孔板每孔加入1ml TRIzol,12孔板每孔加0.5ml TRIzol】 ◇ 懸浮生長(cháng)的細胞 離心收集細胞,吸盡上清,每5-10×106個(gè)細胞(動(dòng)植物或酵母來(lái)源)或1×107個(gè)細胞(細菌來(lái)源)加入1ml TRIzol Reagent【加入TRIzol前不要清洗細胞,否則會(huì )增加mRNA降解的可能性】。用槍吹打幾次或適當渦旋,使其充分裂解。某些酵母和細菌如裂解不充分,可用勻漿器勻漿,使其完全裂解。 【注意】:樣本體積不要超過(guò)加入TRIzol體積的10%。
3.2 特殊樣本處理【可選】:對于某些富含蛋白,多糖或脂肪的樣本,經(jīng)TRIzol Reagent裂解后可能會(huì )有不溶物或油脂狀漂浮物出現。此時(shí)需12,000g 4℃離心10min,之后吸取澄清的上清液至一新的離心管中。 3.3 室溫孵育5min,使得核蛋白體完全分解。 3.4 按照每1ml TRIzol Reagent加入0.2ml 氯仿,蓋緊蓋子。渦旋混勻或用手劇烈晃動(dòng)15s,室溫孵育2~3min。 3.5 于12,000g 4℃離心15min。離心后混合物分為三層:下層酚-氯仿層,中間層,和上層無(wú)色的水相層。RNA無(wú)一例外的停留在水相層中。水相層的容量約為所加TRIzol Reagent體積的60%。用槍吸取上層無(wú)色水相到一新的離心管中,避免吸到任何中間層或下層成分。 【注意】:如果希望分離DNA和蛋白,請保留中間層和有機層。
4. RNA分離 4.1 RNA的沉淀:a)【可選】如果起始樣本量比較少(<106個(gè)細胞或<10mg組織),加入5-10μg RNase-free的糖原作為核酸助沉劑到水相中。b)按每ml起初TRIzol Reagent加入0.5ml異丙醇,顛倒數次混勻,室溫沉淀10min。如果希望提取microRNA等小RNA,推薦-70℃沉淀過(guò)夜。c)于12,000g 4℃離心10min,在管底可見(jiàn)RNA沉淀,棄上清。
4.2 RNA的清洗:a)按每ml起初TRIzol Reagent加入1ml 75%乙醇重懸沉淀?!咀ⅲ篟NA在75%乙醇中-20℃至少保存1年,4℃至少1周】;b)低速漩渦或顛倒混勻,于7,500g 4℃離心5min,棄上清。再用離心機甩一下(>5,000rpm, 離心1秒),小心吸盡液體。c)操作的最后,簡(jiǎn)單干燥RNA沉淀(空氣干燥或真空干燥5~10min)。不要在真空管里離心干燥RNA。尤為重要的是,不能讓RNA沉淀完全干燥,否則會(huì )極大的降低其可溶性。部分溶解的RNA樣本的A260/A280比值<1.6。 4.3 RNA的溶解:用20~50μl 無(wú)RNases水或含0.5% SDS的無(wú)RNases水溶解RNA,用槍上下吹打2~3次,使其充分溶解,置于-70℃保存或直接用于后續實(shí)驗,如果后續要做酶切反應請勿用SDS。 【注意】:對于肝臟、胰腺、腎臟等RNase含量較高的組織,沉淀可用100%去離子甲酰胺(貨號:MS5515-50ML)溶解。
5. RNA產(chǎn)量的測定 5.1 用無(wú)RNase水稀釋RNA,之后測定在260nm和280nm的吸收值。 5.2 使用公式A260×稀釋倍數×40= μg RNA/ml。 5.3 計算A260/A280比值,比值在1.8~2.0之間視為純度較高,濃度>4 μg/ml的樣品適用于分光光度計測定。 5.4 進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖電泳,確定RNA的完整性和污染情況。
相關(guān)產(chǎn)品
附錄1 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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