Lipo2000 Transfection Reagent 脂質(zhì)體轉染試劑

 點(diǎn)擊丨商城購買(mǎi) 積分領(lǐng)好禮

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑（Lipo2000 Transfection Reagent）是一款多用途轉染試劑，適用于核酸（DNA、RNA）的轉染，能在絕大多數貼壁和懸浮細胞（哺乳動(dòng)物細胞系）提供高效轉染。獨特的配方使其能直接加入培養基，血清的存在不會(huì )影響轉染效率。轉染后無(wú)需去除DNA- Lipo2000復合物或更換培養基，也可根據自身需求在轉染4-6h后更換新鮮培養基。

本品以無(wú)菌液體形式提供，濃度為1mg/ml。其使用方法和Lipofectamine? 2000 Transfection Reagent基本一致，并且經(jīng)過(guò)對HEK293、HeLa等細胞的轉染測試，轉染效率和Lipofectamine? 2000相當。

通常情況下，對于24孔板的DNA轉染，每次用2μl左右，則1.5mlLipo2000約可轉染750個(gè)孔；對于24孔板的siRNA轉染，每次用1μl左右，則1.5mlLipo2000約可轉染1500個(gè)孔；

保存與運輸方法

保存：+4℃保存，1年有效。切勿凍存。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）使用高純的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，內毒素是影響轉染效率高低的重要因素。

2）使用Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑需確保高細胞密度，建議轉染時(shí)細胞密度達90-95%，有助于獲得最高轉染效率和表達水平，且能最小化高轉染活性導致的細胞生長(cháng)降低影響?？赏ㄟ^(guò)優(yōu)化實(shí)驗條件來(lái)降低細胞密度，但需注意不同實(shí)驗間維持一個(gè)標準的接種步驟，因轉染效率依賴(lài)于細胞培養密度。

3）轉染過(guò)程中不要添加抗生素到培養基，否則會(huì )導致細胞死亡。

4）為了獲得最佳的轉染效率，制備轉染復合物時(shí)要求用無(wú)血清培養基（比如Opti-MEM I）稀釋DNA和轉染試劑，因血清會(huì )影響復合物的形成。其他無(wú)血清培養基（比如DMEM）也能用來(lái)稀釋DNA和轉染試劑，但轉染效率有可能會(huì )降低。另外，需要特別注意某些無(wú)血清配方會(huì )抑制Lipo2000介導的轉染，比如CD293, SFMII, VP-SFM等。

5）初次使用制備復合物時(shí)，最好優(yōu)化DNA（μg）和Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑（μl）的比例。DNA和Lipo2000的比例，絕大多數細胞系通常推薦1:2-1:3，比如：24孔板內接種0.5-2×105個(gè)細胞，使用0.8-1μg DNA和2-3μL Lipo2000。通過(guò)調整DNA/ Lipo2000優(yōu)化轉染效率很有必要。

6）Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑應該在4℃保存，不可凍存。使用后立即蓋好蓋子，避免長(cháng)時(shí)間暴露在空氣中，否則有可能導致脂質(zhì)體氧化而影響轉染效率。

7）Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑不能渦旋或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。

8）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

轉染步驟（以質(zhì)粒DNA的24孔板為例）

【注意】：對大多數細胞來(lái)說(shuō)，DNA（μg）和Lipo2000（μl）的比例為1:2~1:3。轉染時(shí)高的細胞密度可以得到高的轉染效率和表達水平，并能減少細胞毒性。

1. 細胞準備

1）貼壁細胞：轉染前一天，用500 μl不含抗生素的培養基接種細胞，使之在轉染時(shí)細胞達90-95%匯合（0.5~2×105 細胞/個(gè)孔，24孔板）。

2）懸浮細胞：轉染當天，于準備DNA-Lipo2000復合物之前，用500μl不含抗生素的培養基接種4~8×105細胞即可。

2.按照以下體系配制DNA- Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑復合物：

1）對于每孔細胞，在EP管內分別加入50μl無(wú)血清培養基（比如Opti-MEM? I Reduced Serum Medium）和0.8 μg DNA輕柔混勻，制成DNA稀釋液。

2）對于每孔細胞，在EP管內分別加入50μl無(wú)血清培養基（比如Opti-MEM? I Reduced Serum Medium）和2.0 μl Lipo2000（注意用前先混勻），輕柔混勻，制成Lipo2000稀釋液，室溫靜置5min?！咀⒁狻浚盒枰?0min內混合稀釋的DNA和Lipo2000，更長(cháng)的等待時(shí)間會(huì )降低活性。如果使用DMEM作為稀釋培養基，那必須在5min內混合稀釋的DNA和Lipo2000。  

3）將DNA稀釋液和Lipo2000稀釋液混合（總體積100μl），輕柔混勻，室溫靜置20min， 形成DNA-Lipo2000復合物，這一混合物可能呈渾濁狀態(tài)，但不會(huì )抑制轉染效率?！咀⒁狻浚篋NA-Lipo2000復合物在室溫下至少可穩定保存5h。

3.將上方制備好的DNA-Lipo2000復合物加入接種好的細胞中，將培養板輕輕地前后搖動(dòng)，使復合物分散均勻?！咀⒁狻浚喝绻跓o(wú)血清條件下轉染，使用含血清的正常培養基進(jìn)行細胞接種。再加入復合物前吸掉培養基，更換為500μl無(wú)血清培養基。

4. 37℃，5% CO2培養箱培養24-48h，直至能進(jìn)行轉基因表達分析，無(wú)需去掉復合物或更換培養基。然而，有必要在4-6 h后更換生長(cháng)培養基，不會(huì )降低轉染活性。

5.特殊說(shuō)明

1）對于穩轉細胞株：則在轉染24h后，按照1:10或更高比例接種細胞到新鮮生長(cháng)培養基。轉染48h后加入篩選培養基。

2）對于懸浮細胞株：在細胞中加入DNA-Lipo2000復合物后，如需要可以4h后加入PMA和/或PHA。比如：對于Jurkat細胞，分別加入PHA-L（終濃度1μg/ml）和PMA（終濃度50ng/ml），可以提高CMV啟動(dòng)子活性和基因表達。對于K562細胞，只加入PMA（終濃度50ng/ml）足以提高啟動(dòng)子活性。

轉染體系的放大或縮小

對于不同的細胞培養板，Lipo2000、DNA、細胞和培養基的使用量根據培養表面的不同按比例進(jìn)行調整，具體參考表I。對于自動(dòng)化、高通量體系，以96孔板形式制備更大的復合物體積。需要注意的是，需要進(jìn)行快速的96孔板轉染（細胞鋪板和轉染同時(shí)進(jìn)行），直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸液加入到復合物內，這樣進(jìn)一步減少了轉染時(shí)間。此種改進(jìn)步驟經(jīng)過(guò)293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低。

表I.不同細胞培養容器中轉染時(shí)培養基、核酸及Lipo2000用量

【*】：不同廠(chǎng)商提供的細胞培養容器表面積可能有所不同。

【**】：稀釋DNA/RNA或Lipo2000所用的無(wú)血清培養基用量。

【注意】：該表用量?jì)H供參考，具體用量請根據細胞類(lèi)型、鋪板密度等其他實(shí)驗條件進(jìn)行優(yōu)化。

附表II  Lipo2000脂質(zhì)體轉染試劑用于不同細胞轉染用量參考（以96孔板為例）

                                                                                  — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。