PEI 40K Transfection Reagent

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺轉染試劑

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產(chǎn)品標簽

PEI 40K轉染試劑，PEI 25K轉染試劑；線(xiàn)性化聚乙烯亞胺；PEI 40000；PEI25000；Lipofectamine 2000；Lipofectamine 3000；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI 40000（Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K）是一款優(yōu)秀和低成本的瞬時(shí)性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中，PEI在寬廣的生產(chǎn)規模內（從96孔板到100L生物反應器）能提供連續性的高基因表達。

作為線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI25000（PEI 25K）的升級產(chǎn)品，操作更簡(jiǎn)單，且具有連續性的更高表達滴度，優(yōu)勢在于：1）PEI 25K轉染溶液通常需幾個(gè)小時(shí)來(lái)配置，然而，PEI 40K在2個(gè)小時(shí)內即可轉化為即用型的溶液；2）PEI 25K含4-11%殘留的丙?；鶊F，該基團阻止聚合物骨架緊密結合到DNA。然而，PEI 40K完全去丙?；Y構，意味著(zhù)每個(gè)批次保持連續性更高轉化效率。

本品是PEI 40K的無(wú)菌溶液，濃度為1mg/ml，直接使用即可。1ml本品足以用來(lái)轉染250μg DNA，或者，6孔板內約做60-120次轉染。

保存與運輸方法

保存：+4℃保存，1年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）請務(wù)必使用高質(zhì)量的無(wú)內毒素質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

2）使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養基沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

3）對于某些類(lèi)型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著(zhù)提高重組蛋白的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時(shí)細胞的匯合度仍為60-80%。

4）對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

5）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

試劑準備

稀釋液準備：用細胞培養級水來(lái)制備150mM NaCl（比如：稱(chēng)取876.6mg高純NaCl加入80ml細胞培養級水，充分溶解后，定容到100ml，經(jīng)0.1或0.2μm濾膜過(guò)濾除菌。）

【注意】：也可使用商業(yè)化的無(wú)血清培養基（比如Opti-MEM I）來(lái)制備轉染復合物。

一、操作方法（貼壁細胞）

1.1鋪板

a）轉染前18-24h進(jìn)行鋪板，調整合適的細胞密度（參考表1），使其在轉染時(shí)細胞密度達60-80%。

【注意】：高血清水平會(huì )抑制轉染效率，大多數情況，低血清水平（≤5%）能產(chǎn)生最高的轉染效率。

1.2轉染步驟（以6孔板的單孔為例）

a）轉染前1-2h，每孔替換為3ml含2%血清的新鮮生長(cháng)培養基。

b）制備PEI 40K-DNA轉染復合物（嚴格按照順序進(jìn)行）：①往300μl稀釋液內加入2μg質(zhì)粒DNA,低速混合/渦旋均勻；②往混合物內加入8μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低速渦旋5s；③無(wú)菌環(huán)境，室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

c）將PEI 40K-DNA轉染復合物轉到孔內。輕輕晃動(dòng)培養皿或輕微渦旋，使得復合物分散均勻。

【注意】：以上步驟可通過(guò)調整PEI 40K-DNA復合物在稀釋液內的體積（稀釋液為培養總體積的10%）來(lái)進(jìn)行放大或縮?。蓞⒖急?）。確保DNA/PEI 40K=1：4！

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培養箱內培養細胞，轉染后12-18h，去除含PEI 40K-DNA復合物的培養液，更換新鮮的生長(cháng)培養基。

b）通常，轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀(guān)察到最大水平的表達。

二、操作方法（懸浮細胞）

2.1接種準備

于轉染前2-3h，按照1.0×106/ml培養接種細胞。

2.2 轉染步驟（以：50ml培養物/250ml搖瓶為例）

a）制備PEI 40K-DNA轉染復合物（嚴格按照順序進(jìn)行）：①往2.5ml稀釋液內加入50μg質(zhì)粒DNA,低速混合/渦旋均勻；②往混合物內加入200μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低速渦旋5s；③無(wú)菌環(huán)境，室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

b）將全部轉染溶液加入25ml懸浮細胞內。

c）將懸浮細胞放回培養箱內。

2.3 孵育

a）在培養箱內搖動(dòng)培養2-3h，之后加入25ml新鮮生長(cháng)培養基。重新放回培養箱。

b）通常，轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀(guān)察到最大水平的表達。

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