【溫馨提示】：如果你對市場(chǎng)上常見(jiàn)中文名都叫【博萊霉素】，但英文名又不同的一些產(chǎn)品感到有所迷惑，可參考我司【懋康生物】整理的Bleomycins (BLMs) 博萊霉素家族常用抗生素成員的應用選擇，也許有所收獲。

博萊霉素家族常見(jiàn)產(chǎn)品：

篩選抗生素：Zeocin【凍干粉】  Zeocin【100mg/ml】     Phleomycin 腐草霉素

細胞功能研究：Bleomycin Sulfate 硫酸博萊霉素     Bleomycin A5 Hydrochloride 鹽酸博萊霉素A5

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Zeocin 博萊霉素（博來(lái)霉素）；Phleomycin 腐草霉素；Sh ble基因；Streptomyces verticillus 輪枝鏈霉菌；Hygromycin B 潮霉素B；G418遺傳霉素；CAS NO.：11006-33-0

基本描述：

Zeocin?是博來(lái)霉素/腐草霉素（bleomycin/phleomycin）抗生素家族的成員之一，從輪枝鏈霉菌Streptomyces verticillus中分離得到，對細菌、真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳動(dòng)物細胞具很強的毒性。來(lái)自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因賦予Zeocin抗性。

Zeocin?是腐草霉素D1的商業(yè)名稱(chēng)，一種堿性、水溶性、銅離子螯合的糖肽抗生素。銅離子的存在使得溶液為藍色，此銅螯合的形式為無(wú)活性。一旦進(jìn)入細胞后，二價(jià)銅離子（Cu2+）被還原為一價(jià)銅離子（Cu+），并被細胞內的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin?被活化，嵌入DNA使其斷裂，最終導致細胞死亡。

抗性基因：

Zeocin?抗性由編碼一種13,665Da大小蛋白的Sh ble基因（Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene）賦予，該蛋白化學(xué)計量方式結合Zeocin?，抑制其DNA雙鏈切割活性。因此，能表達此蛋白的真核和原核宿主細胞被賦予Zeocin?抗性。

基本特性：

1）CAS NO.：11006-33-0

2）化學(xué)式：C55H83N19O21S2Cu

3）分子量：1137.41 g/mol

4）外觀(guān)：藍色溶液（100mg/ml in deionized，autoclaved water）

5）運輸：冰袋運輸

6）保存：-30°C~-10°C，至少1年有效

7）大腸桿菌篩選：25-50μg/mL（低鹽LB培養基，NaCl濃度不能超過(guò)5g/L）

8）酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養基）

9）哺乳動(dòng)物細胞篩選：50-1000μg/mL（合適培養基，根據細胞系而不同）

注意事項：

1）Zeocin?對光敏感，需將抗生素，或含該抗生素的平板或培養基置于黑暗處。

2）降低細菌培養基的鹽濃度，調整pH到7.5使其保持活性，因高離子強度和酸或堿性都會(huì )抑制Zeocin?活性；

3）儲存Zeocin?在-30°C~-10°C，使用前需冰上融化。

4）Zeocin?有毒，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（應用舉例）：

1）大腸桿菌（E. Coli.）

宿主：不能包含Tn5轉座子（比如：Top10，DH5，DH10）

培養基：使用低鹽LB（10g Trypton，5g NaCl，5g Yeast extract），pH 7.5，防止Zeocin?失活

選擇濃度：25-50μg/mL用于大腸桿菌篩選

2）酵母菌（Yeast）

宿主：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,畢赤酵母（Pichia pastoris）

培養基：含1M山梨醇的YPD（電轉化細胞）；YPD或基本培養基（化學(xué)轉化細胞）；測試培養基調pH到6.5-8.0，選擇pH值允許使用最低濃度Zeocin?。

轉化方法：電轉法，使用鋰離子步驟或使用EasyComp試劑盒。不能使用原生質(zhì)體用于酵母轉化，因Zeocin?會(huì )引起完整細胞死亡。

選擇濃度：50-300μg/mL，取決于酵母菌類(lèi)型、培養基pH和離子強度。建立殺滅曲線(xiàn)確定能殺死未轉化宿主細胞的最低Zeocin?濃度。

3）哺乳動(dòng)物細胞（Mammalian cells）

50-1000μg/mL用于篩選穩定轉染細胞系（平均常用濃度為250-400μg/mL）。取決于細胞系，需要2-6周用Zeocin?篩選得到穩轉集落（foci）。進(jìn)行穩轉株正式篩選前，需確定能夠殺死所有未轉染宿主細胞的最低Zeocin?濃度。

1） 確定細胞對Zeocin?的敏感性

2）篩選穩定轉染細胞系

篩選小技巧：若是細胞對Zeocin?耐性更強，可用含Zeocin?培養基進(jìn)行細胞分盤(pán)，并置于37°C孵育2-3h，使得細胞貼壁。然后將細胞置于4°C，2h。記得使用Hepes作為培養基的緩沖體系。重新將細胞置于37°C孵育。4°C孵育細胞的目的是短時(shí)間內終止細胞分化，使得Zeocin?能發(fā)揮作用，殺死細胞。

訂購信息：原裝進(jìn)口，現貨供應。歡迎來(lái)電訂購，電話(huà)：021-54736159，手機：18121428569，楊先生。

【注意1】：對Zeocin不敏感的細胞，如絲狀真菌和一些酵母菌，建議使用腐草霉素（貨號：MS0008-1ML），其抗性同樣源于Sh ble基因。 【注意2】：特價(jià)供應含Zeo+基因序列的質(zhì)?！?— pcDNA 3.1/Zeo（+）（Invitrogen of Thermo），序列圖譜點(diǎn)擊下載文檔。

應用圖片【Zeocin?篩選下的HEK293細胞】：

HEK293細胞用含10% FBS，1mM L-谷氨酰胺和400μg/mL雙抗的培養基，分別在添加和未添加400μg/mLZeocin?的培養基選擇培養。

 圖1，未經(jīng)Zeocin?篩選的HEK293細胞。

 圖2，經(jīng)Zeocin?篩選3天后的HEK293細胞。隨著(zhù)質(zhì)膜破裂，往細胞外延伸長(cháng)出長(cháng)臂（long appendages）。（見(jiàn)實(shí)心箭頭標注）

 圖3，經(jīng)Zeocin?篩選3天后的HEK293細胞。細胞開(kāi)始破裂，培養基內發(fā)現細胞顆粒。（見(jiàn)空心箭頭標注）

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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