【溫馨提示】：
見(jiàn)我司懋康生物整理的酵母雙雜交檢測（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專(zhuān)題。
基本描述
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?（酵母轉化試劑盒）是一款專(zhuān)門(mén)設計用于酵母轉化和文庫篩選的試劑盒，比目前商業(yè)或公開(kāi)的文獻方法更快捷和更有效。本試劑盒制備的酵母細胞可立即用于轉化或凍存待用（≤ -70°C）。本試劑盒制備的細胞適用于環(huán)形和線(xiàn)性DNAs轉化，同時(shí)也能用于其他真菌包括C. albicans，S. pombe和P. pastoris的轉化。
產(chǎn)品亮點(diǎn)：
~ 高轉化效率：每μg質(zhì)粒DNA（環(huán)形）可產(chǎn)生105- 106個(gè)酵母轉化子；
~ 制備好的感受態(tài)細胞可凍存后待用；
~ 快速簡(jiǎn)單步驟于10min內可制備酵母感受態(tài)細胞；
~ 簡(jiǎn)單單一步驟，1h內完成轉化；
~ 適用菌株類(lèi)型廣（S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris）；
~ 簡(jiǎn)單方法用于多質(zhì)粒轉化；
產(chǎn)品組分：本試劑盒可做120個(gè)常規轉化或600個(gè)微量轉化實(shí)驗。試劑盒4℃一年有效。
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組分 |
規格 |
保存 |
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EZ1 Solution |
60ml |
0-4℃ |
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EZ2 Solution |
6ml |
0-4℃ |
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EZ3 Solution |
60ml |
0-4℃ |
操作流程【見(jiàn)下圖】：
A. 感受態(tài)細胞制備
30℃，于10ml YPD肉湯培養酵母菌直至中數量級（~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0）。以下步驟室溫進(jìn)行。
A1，500 x g離心細胞4min，吸掉上清液；
A2，加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新離心沉淀細胞，吸掉上清液；
A3，加入1ml EZ2溶液重懸沉淀細胞。
此時(shí)獲得的感受態(tài)細胞即可直接用于轉化或凍存備用（≤ -70°C）。注意需緩慢凍存細胞，不可使用液氮瞬間凍存細胞。
B. 轉化
以下步驟適用于新鮮制備和凍存（室溫融化）的酵母感受態(tài)細胞。
B1，取50μl感受態(tài)細胞與0.2-1μg DNA（體積少于5μl）混合；加入500μl EZ3溶液，完全混合；
B2，30°C孵育45min，孵育過(guò)程中用手指輕彈或低速渦旋（如果適用于轉化DNA）2-3次讓其混勻；
B3，從上面轉化混合液中取50-150μl到適當平板上，沒(méi)有必要沉淀或清洗細胞。、
B4，30°C孵育平板2-4天使得轉化子生長(cháng)。
訂購信息：Zymo Research原裝正品，現貨供應。歡迎來(lái)電咨詢(xún)，021-54736159，QQ：2971634497。
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格 |
價(jià)格（元） |
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T2001 |
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?（酵母轉化試劑盒） |
120 Rxns |
1532 |
T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? User Manual
常見(jiàn)問(wèn)題（FAQs）：
1. 試劑盒內含什么及工作原理？
答復：試劑盒所用步驟是特別設計，某些步驟，類(lèi)似于基于鋰陽(yáng)離子的方法，不需要原生質(zhì)體制備。作用機制可能涉及一些代謝通路，但并未完全清晰。
2. 試劑盒是否適用于C. albicans，S. pombe，或Pichia pastoris？
答復：根據Zymo實(shí)驗室內部數據，適合以上菌株感受態(tài)細胞制備和轉化。
3. 感受態(tài)細胞≤ -70°C能存放多久？感受態(tài)細胞的融化方法？
答復：感受態(tài)細胞≤ -70°C保存半年轉化效率不會(huì )有損失，超過(guò)半年效率開(kāi)始逐漸降低。
4. 感受態(tài)細胞的反復凍融會(huì )影響轉化效率？
答復：室溫融化。
5. 限制性?xún)惹忻柑幚淼馁|(zhì)粒是否不經(jīng)純化就能直接轉化？
答復：是的。不同的內切酶消化緩沖液對轉化效率影響微弱。每個(gè)轉化實(shí)驗將DNA體積調整到5μl。
6. 是否需要使用含山梨醇的平板？
答復：不需要。任何平板都適合本轉化實(shí)驗。
7. 是否添加載體DNA？
答復：不需要添加載體DNA。
引用文獻（Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?）：
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Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species. |
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The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength. |
— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
