MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)
MKRed核酸凝膠染料（效果同GelRed，DuRed）
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活動(dòng)周期：2017.11.1-2017.11.15日 活動(dòng)對象：僅限于生物相關(guān)行業(yè)老師（終端客戶(hù)）參加，同行業(yè)公司或代理商請勿參與。 實(shí)驗數據：只需與任何核酸凝膠染料（EB，GelRed，Goldview等）的比較實(shí)驗圖片，簡(jiǎn)單描述實(shí)驗條件（凝膠類(lèi)型，強度，染色方法），并附上你忠實(shí)的評價(jià)，即可享紅包獎勵啰。 特別聲明：本活動(dòng)的最終解釋權歸上海懋康生物科技有限公司所有。 |
搜索關(guān)鍵詞：
MKRed 核酸凝膠染料；GelRed；DuRed；Ethidium Bromide, EB；Ames Test 艾姆斯試驗法；GoldView；SYBR Green I；
訂購信息： 【活動(dòng)周期內按活動(dòng)價(jià)執行】
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品編號 |
規格 |
價(jià)格（元） |
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MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) MKRed核酸凝膠染料（效果同GelRed） |
MF0754-500UL |
500μl |
460 |
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MF0754-2500UL |
5×500μl |
1850 |
產(chǎn)品特征
□ 傳統核酸染料（Ethidium Bromide, EB，溴化乙錠）的無(wú)毒安全替代品，經(jīng)艾姆斯試驗法測試認證。
□ 新型核酸染料（GelRed，DuRed）的同等優(yōu)質(zhì)替代品，經(jīng)實(shí)驗室內部測試認證【見(jiàn)圖1】。
產(chǎn)品優(yōu)勢
□ 安全無(wú)毒：獨特油性大分子，無(wú)法穿透細胞膜進(jìn)入細胞；不易揮發(fā)，人體不會(huì )吸入；艾姆斯試驗法（Ames Test）表明凝膠染色濃度下完全沒(méi)有誘變性，與EB的強致癌性相比，是一種安全無(wú)毒的核酸染料。
□ 適用范圍廣：適用于瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳的dsDNA, ssDNA以及RNA染色。
□ 操作靈活簡(jiǎn)單：可選擇電泳前（膠染法）或電泳后（泡染法）染色。使用方法同EB，GelRed，DuRed
，不用重新適應和摸索新的電泳和染色條件。
□ 檢測方便：與EB具相同的光譜特征，使用與觀(guān)察EB相同的普通紫外凝膠透射儀即可，無(wú)需更改濾光片和觀(guān)察裝置。標準EB濾光片或SYBR濾光片都適用。
□ 靈敏度高，對核酸遷移影響?。?/span>適用于各種大小片段的電泳染色。電泳條帶不易完全，片段不易遷移，不像SYBR Green I，染料濃度高時(shí)會(huì )引起條帶彎曲和遷移現象【見(jiàn)附件常見(jiàn)核酸染料的性能比較】。
□ 穩定性高：室溫穩定保存一年，長(cháng)期不用可置于+4℃保存二年。
□ 易去除，兼容性強：用酚/氯仿提取和乙醇沉淀，或商業(yè)化的膠回收試劑盒可輕易去除核酸中的染料；與常見(jiàn)的下游應用如克隆，連接和測序兼容。
應用示例：
圖1. GelRed（Biotium）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-6是不同上樣量的Marker III（依次為100ng、50ng、12.5ng、6.25ng、3.125ng）；7-11是不同上樣量的血液基因組DNA（依次為200ng、150ng、100ng、50ng、25g）。凝膠配制條件：往25ml凝膠溶液加入0.25g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl GelRed或MKRed染料，混勻，倒膠。電泳條件：1%瓊脂糖凝膠，150V，20min。
圖2. EB（MPbio, USA）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-5是不同管菌液的PCR產(chǎn)物（目的片段500bp左右）。凝膠配制條件：往20ml凝膠溶液加入0.2g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl EB或MKRed染料，混勻，倒膠。電泳條件：1%瓊脂糖凝膠，150V，25min。
常見(jiàn)問(wèn)題
1. MKRed能用于ssDNA或RNA染色嗎？
回復：MKRed能用于ssDNA和RNA染色，但對dsDNA的檢測靈敏度比ssDNA或RNA高2倍。
2. MKRed與下游應用如克隆，連接或測序兼容嗎？
回復：是的，建議用酚-氯仿提取和乙醇沉淀，或用商業(yè)化的膠回收試劑盒來(lái)去除DNA中的染料。
3. MKRed與什么上樣緩沖液兼容？
回復：我們一般使用6×上樣緩沖液（含15%甘油，7.5% Ficoll 400，0.05%溴酚藍和0.1% Patent Blue VF）。上樣緩沖液中若含SDS，可能會(huì )引起預制MKRed凝膠內的核酸條帶發(fā)生彌散。若發(fā)生這種情況，建議使用泡染色對核酸染色。
4. 是否能將MKRed加入DNA中，然后進(jìn)行電泳檢測？使用濃度多少？
回復：可以，使用濃度0.5×即可。但我們推薦用膠染法或泡染法來(lái)檢測，能保證得到理想結果。
5. 哪種發(fā)射濾片適用于MKRed？
回復：使用EB濾片成像即可。SYBR濾片也能用于成像并得到較好的結果。
6. 電泳后的MKRed預制膠能重復使用？
回復：不建議如此使用，因再次電泳信號降低很明顯。
7. MKRed的工作原理是什么？化學(xué)結構是什么？
回復：工作原理是通過(guò)專(zhuān)一嵌入并結合DNA?；瘜W(xué)結構不對外公開(kāi)。
8. 電泳過(guò)程中MKRed會(huì )發(fā)生遷移嗎？
回復：和EB一樣，MKRed不會(huì )遷移。沒(méi)有必要加染料到電泳緩沖液中，用MKRed染色的凝膠比EB更加均化。
9. MKRed需要避光使用嗎？
回復：MKRed非常穩定?？稍谑覂裙庀率褂?，但染料建議避光保存。
10. 不小心將MKRed暴露在室內光下，是否還能用？
回復：建議MKRed避光長(cháng)期保存。有客戶(hù)不小心將其暴露在室內光下一個(gè)月，MKRed仍能很好的染色。
11. MKRed能用于甲醛、聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA或PFGE凝膠？
回復：是的。有文獻報道用MKRed的同類(lèi)染料GelRed對乙二醛和甲醛瓊脂糖凝膠進(jìn)行RNA電泳染色（膠染法）。用泡染法對聚丙烯酰胺、DGGE和EMSA凝膠染色。對PFGE凝膠可用膠染法或泡染法。
12. MKRed能用于彗星實(shí)驗（COMET assay）？
回復：是的，可用泡染法來(lái)染色。
保存：+4℃避光干燥保存，2年有效。
運輸：室溫運輸。
注意事項
1） MKRed雖為安全無(wú)毒的核酸染料，對人無(wú)傷害，但請科研人員操作過(guò)程中注意防護，盡量避免與染料的直接接觸。且染料的廢棄需符合當地規定。
2） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
一、膠染法（同EB，電泳前染色）
1. 制膠時(shí)加入MKRed 核酸染料（每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μLMKRed 10,000×水溶液）。
2. 按照常規方法進(jìn)行電泳。
3. 用普通紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發(fā)）觀(guān)察以及標準EB濾光片成像。
1) 此方法比較節省染料，500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
2) 由于MKRed具有良好的熱穩定性，可以直接添加到熱的瓊脂糖溶液中而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。
3) MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
4) 含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
5) 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問(wèn)題是否與染料有關(guān)。如果染色后問(wèn)題依舊存在，則說(shuō)明問(wèn)題與染料無(wú)關(guān)，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長(cháng)的凝膠；延長(cháng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
6) 膠染法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
二、泡染法（電泳后染色）
1. 按照常規方法進(jìn)行電泳。
2. 用H2O將MKRed 10,000×水溶液稀釋約3,300倍制成3× 染色液（例如：將15μL MKRed 10,000×水溶液和5mL 1M NaCl混合，之后加到45mL H2O中混勻）?！咀⒁狻浚喝旧褐屑尤?.1M NaCl能提高靈敏度，但如果膠染色再次使用會(huì )比較容易有沉淀產(chǎn)生。
3. 將凝膠小心地放入合適的容器中，緩慢加入足量的3× 染色液浸沒(méi)凝膠。室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時(shí)間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝膠，染色時(shí)間通常介于30min-1h，丙烯酰胺含量增加，染色時(shí)間延長(cháng)。
4. 不需要脫色，但若有需要可用水清洗一下凝膠以降低背景。
5. 用普通紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發(fā)）觀(guān)察以及標準EB濾光片成像。
【注意】
1） 用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重復使用3次左右。
2） 3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
常用核酸染料的性能比較
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產(chǎn)品貨號 |
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靈敏度 |
高 |
高 |
低 |
低 |
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穩定性 |
高 |
低 |
高 |
高 |
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對核酸遷移的影響 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
染料濃度高時(shí)，條帶易完全，遷移現象明顯 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
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安全性 |
獨特油性大分子，不揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細胞膜，安全無(wú)毒。Ames Test表明染色濃度完全無(wú)誘變性，無(wú)致癌毒性。 |
花箐染料，能穿透細胞膜，但容易生物降解，不會(huì )在體內殘留，安全無(wú)毒。 |
主要成分為吖啶橙，一種煤焦油提取物，具高毒，致癌，高誘變性。 易揮發(fā)升華，易吸入人體，能進(jìn)入活細胞，不易被生物降解，長(cháng)期留在體內。 |
分子量小，易揮發(fā)升華，易吸入人體，不易生物降解，體內長(cháng)期殘留。Ames Test表明容易引起突變，是強誘變劑，高致癌性。 |
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適用性 |
通用大小片段電泳染色。 與EB具相同的光譜特性，無(wú)需更改濾光片和觀(guān)察裝置。標準EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用普通紫外凝膠透射儀觀(guān)察即可，300nm處得最佳激發(fā)。 |
100bp以上電泳染色。適用于254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光凝膠透射儀觀(guān)察。 |
100bp以上電泳染色。使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光凝膠透射儀觀(guān)察。 |
100bp以上電泳染色。使用普通紫外凝膠透射儀觀(guān)察即可。 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
