BL21系列感受態(tài)細胞常見(jiàn)問(wèn)題
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Part 1、BL21/BL21（DE3）/ BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)細胞
一、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型
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宿主菌Host Strain |
基因型Genotype |
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BL21 strain |
E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm |
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BL21 (DE3) strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR) |
基因型說(shuō)明：
a）以上三個(gè)宿主菌都是大腸桿菌E. Coli. B/r菌株，不含lon蛋白酶，也缺乏外膜蛋白酶OmpT。這兩個(gè)關(guān)鍵蛋白酶的缺乏降低菌株內表達外源蛋白的降解率。
b）DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（DE3 lysogen）（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能誘導T7 RNA聚合酶的表達。
c）pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。pLysS質(zhì)粒賦予菌株氯霉素抗性（CamR），而且含有p15A復制起始子，這一起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1復制起始子的質(zhì)粒（比如pUC或pBR322來(lái)源的質(zhì)粒）。
二、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的應用特征
BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌內T7啟動(dòng)子表達載體（比如pCAL, pET載體）呈現不同的蛋白表達水平。BL21（DE3）感受態(tài)細胞是全能型菌株，滿(mǎn)足高水平蛋白表達且容易誘導。BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)更嚴格控制毒性蛋白表達且具氯霉素抗性。
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表達宿主 |
誘導方法 |
優(yōu)點(diǎn) |
缺點(diǎn) |
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BL21 |
λ噬菌體CE6感染 |
最嚴格控制背景表達（非誘導表達） |
誘導不如DE3衍生菌有效；誘導（感染）過(guò)程更冗長(cháng) |
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BL21 (DE3) |
IPTG誘導lacUV5啟動(dòng)子驅動(dòng)的T7聚合酶 |
高水平表達 |
T7聚合酶泄露表達，引起潛在毒性蛋白的背景表達（非誘導表達） |
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BL21 (DE3) pLysS |
IPTG誘導的T7聚合酶 |
容易誘導 |
與BL21 (DE3)相比，稍微抑制誘導表達 |
三、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白表達特征
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表達宿主 |
異源蛋白（Heterologous protein）表達特征 |
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BL21 strain |
非毒性蛋白的高水平表達，不能用于T7啟動(dòng)子驅動(dòng)的蛋白表達（如pET） |
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BL21 (DE3) strain |
非毒性蛋白的高水平表達，用于T7啟動(dòng)子驅動(dòng)的蛋白表達（如pET） |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
非毒性和毒性蛋白的高水平表達，背景表達低于BL21 (DE3)，BL21 |
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格 |
價(jià)格（元） |
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10×100μl |
280 |
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MF2331-5000UL |
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細胞 |
50×100μl |
1280 |
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10×100μl |
280 |
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50×100μl |
1280 |
