活性氧（reactive oxygen species, ROS）熒光探針系列之：
CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化應激檢測試劑
背景需求：
氧化應激是由于反應性活性氧物質(zhì)ROS產(chǎn)生和細胞清除ROS的不平衡導致的，ROS與核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)反應導致細胞和組織損傷。ROS的過(guò)多累積往往引起某些疾病的發(fā)生，包括炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、衰老以及衰老相關(guān)的退行性疾病等。為此，ROS產(chǎn)生及其治病機理的研究越來(lái)越受到科學(xué)家的關(guān)注。
基本介紹：
CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）是專(zhuān)門(mén)設計用來(lái)可靠檢測活細胞內活性氧ROS的一系列熒光探針。這些細胞膜滲透性的試劑當處于還原態(tài)時(shí)無(wú)熒光或極弱熒光，一旦被氧化后發(fā)出強熒光。
Thermo Fisher (Invitrogen)提供三種CellROX氧化應激試劑，CellROX Green Reagent是一種DNA染料，一旦氧化后與DNA結合，因此，信號主要定位在細胞核和線(xiàn)粒體。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的熒光信號定位在細胞質(zhì)。CellROX氧化應激試劑產(chǎn)生的熒光皆可用傳統的熒光顯微鏡、高內涵篩選儀器（HCS）、流式細胞儀、熒光酶標儀或高通量篩選（HTS）。還與各種臺式儀器兼容，比如FLoid?，Tali?，和Attune?儀器。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下優(yōu)勢：
◇ 染色流程非常簡(jiǎn)單（見(jiàn)Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程圖），試劑直接加入完全培養基或緩沖液內的細胞。
◇ 與傳統的ROS檢測探針相比，光穩定性非常好。另外，某些CellROX氧化應激試劑經(jīng)后期的甲醛固定和去污劑透化處理后，仍維持良好的熒光信號（見(jiàn)Table 1. ROS檢測方法的比較表）。
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CellROX Deep Red Reagent |
CellROX Orange Reagent |
CellROX Green Reagent |
DCFH-DA |
DHE |
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Readout |
CellROX探針本身是還原態(tài)，無(wú)熒光，一旦氧化后發(fā)亮綠色、橘色或深紅色熒光。CellROX具細胞膜滲透性，能輕松加載進(jìn)入活細胞。 |
本身無(wú)熒光，氧化后發(fā)強綠色熒光。具細胞膜滲透性。 |
本身藍色熒光，進(jìn)入細胞氧化后，與DNA結合生成紅色熒光。 |
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Common filter set |
Cy5 |
RFP |
FITC |
FITC |
Suitable filter |
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Ex/Em (nm) |
640/665 |
545/565 |
485/520 |
504/529 |
518/606 |
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Live cell–compatible |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
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Labeling in complete medium |
Yes |
Yes |
Yes |
No |
Yes |
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Formaldehyde-fixable |
Yes |
No |
Yes |
No |
No |
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Detergent-resistant |
No |
No |
Yes |
No |
No |
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Compatible platforms |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer *Floid cell imaging station *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Floid cell imaging station |
*Imaging *HCS |
◇ 通過(guò)對內皮細胞維生素K3誘導的ROS生成的抑制實(shí)驗，發(fā)現CellROX氧化應激試劑特異性檢測ROS（見(jiàn)Fig 2 基于CellROX氧化應激試劑定量和統計分析氧化應激水平）。
A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光共聚焦專(zhuān)用玻底培養皿內接種培養牛肺動(dòng)脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。向某些對照和維生素K3處理孔內加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50μM）。之后細胞用CellROX Green Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經(jīng)PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置顯微鏡下檢測（40X物鏡）。N-乙酰半胱氨酸處理抑制TBHP誘導生成的ROS，證實(shí)CellROX檢測到的熒光信號來(lái)自化合物誘導產(chǎn)生的ROS。
B）CellROX Orange Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動(dòng)脈內皮細胞（BPAE）。之后用含TBHP（200μM）或不含TBHP的培養基37℃處理2h。向某些對照和TBHP處理孔內加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10μM）。之后細胞用CellROX Orange Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經(jīng)PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP誘導產(chǎn)生的ROS，證明CellROX檢測到的熒光信號來(lái)自化合物誘導產(chǎn)生的ROS。
C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動(dòng)脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。在孵育的后30min向某些對照和維生素K3處理孔內加入超氧化物清除劑MnTBAP（100μM）。之后細胞用CellROX Deep Red Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經(jīng)PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。
◇ CellROX氧化應激試劑能偶與其他細胞活力檢測探針聯(lián)合檢測，是一種非常有用的多重熒光方法來(lái)測定大量的細胞現象（見(jiàn)Fig 3 人U2-OS細胞的氧化應激檢測）。
Fig 3. 表達Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤細胞（U2-OS）用維生素K3(Menadione, 100μM)處理1h。之后用CellROX Green Reagent（5μM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。細胞清洗后置于活細胞成像液內檢測。
CellROX訂購信息：以上所有產(chǎn)品均為L(cháng)ife（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為10x50 μg（10支50μg單個(gè)包裝構成）。我司對C10444、C10422進(jìn)行拆開(kāi)銷(xiāo)售，特惠價(jià)為2180元/支，單支50μl，現貨銷(xiāo)售，歡迎訂購。
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格 |
報價(jià)（元） |
小包裝供貨 |
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5 x 50 uL |
7156 |
是（50 μl） |
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C10443 |
CellROX Orange Reagent 氧化應激探針（橙色） |
5 x 50 uL |
7214 |
否（50 μl） |
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5 x 50 uL |
7175 |
是（50 μl） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
