前言：
在免疫印跡（WB）、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP），以及染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）等許多研究組織或細胞內蛋白表達，蛋白純化以及蛋白-蛋白、蛋白-核酸間互作的各種免疫實(shí)驗內，首先要做的第一步就是進(jìn)行組織（細胞）裂解，通過(guò)破壞細胞膜或細胞核膜的屏障，將要待研究的對象釋放到體外環(huán)境中。為此，擁有合適的組織/細胞裂解液是開(kāi)展實(shí)驗重要的一環(huán)。
針對各種下游實(shí)驗的特點(diǎn)，懋康生物（MKBio）提供幾種常見(jiàn)的組織/細胞裂解液，基本涵蓋用戶(hù)需求。
總表：各種組織/細胞裂解液主要特點(diǎn)和應用差異（MKBIO）
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產(chǎn)品 貨號 |
MP1501 |
MP1502 |
MP1503 |
MP1504 |
MP1505 |
MP1506 |
MP1507 |
MP1508 |
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產(chǎn)品 名稱(chēng) |
RIPA裂解液（強） |
RIPA裂解液（中） |
RIPA裂解液（弱） |
WB/IP裂解液 |
NP-40裂解液 |
SDS裂解液 |
RIPA裂解液（強，無(wú)抑制劑） |
WB/IP裂解液（無(wú)抑制劑） |
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有效裂解成分 |
1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% NP-40，0.25%脫氧膽酸鈉 |
1% Triton X-100 |
1% NP-40 |
1% SDS |
1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% Triton X-100 |
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裂解強度 |
強 |
中 |
溫和 |
溫和 |
溫和 |
強 |
強 |
溫和 |
|
對膜蛋白的提取 |
很好 |
較好 |
一般 |
一般 |
一般 |
很好 |
很好 |
一般 |
|
對胞漿蛋白的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
|
對核蛋白的提取 |
很好 |
較好 |
較好 |
較好 |
較好 |
很好 |
很好 |
較好 |
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胞漿磷酸化蛋白提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
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核轉錄因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
|
蛋白酶抑制劑 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
不含 |
不含 |
|
磷酸酶抑制劑 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
不含 |
不含 |
|
主要用途 |
WB，IP |
WB，IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，ChIP |
WB，IP |
WB，IP，Co-IP |
組織/細胞裂解液選擇說(shuō)明：
a） 對于普通的WB，IP，Co-IP，推薦使用WB/IP裂解液（# MP1504-100ML），經(jīng)此裂解所得的產(chǎn)物沒(méi)有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續操作。另外，此裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的WB檢測。
b） 對于某些特殊蛋白的IP，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可嘗試用RIPA（強，中，弱）或NP-40裂解液。若發(fā)現IP背景很高，說(shuō)明非特異性蛋白被沉淀下來(lái)，則需選用裂解強度較高的裂解液，如RIPA（強或中）。如果發(fā)現目的蛋白無(wú)法被沉淀下來(lái)，說(shuō)明裂解液的強度過(guò)強，可使用較溫和的裂解液如RIPA（弱）或NP-40裂解液。
c） 對于某些難溶解蛋白的WB，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可嘗試使用裂解強度更高的裂解液如RIPA（強，中）或SDS裂解液。
d） 對于特定用途需要自行添加特定抑制劑或不需添加抑制劑，可考慮選擇RIPA裂解液（強，無(wú)抑制劑）（# MP1507-100ML）或WB/IP裂解液（無(wú)抑制劑）（# MP1508-100ML），后者很多情況下兼容酶活性和生物小分子的檢測，具體兼容性如何請自行測試，我司無(wú)相應數據提供。
補充知識點(diǎn)
一、 關(guān)于去垢劑（detergents）
1.1 去垢劑的分類(lèi)
幾種組織/細胞裂解液裂解強度（應用）的差異主要還是配方中去污劑種類(lèi)和濃度的不同。去污劑分為變性去污劑（denaturing detergents）和非變性去污劑（non-denaturing detergents），前者可以是陰離子比如SDS，或陽(yáng)離子比如乙基三甲基溴化銨，這些去垢劑總體來(lái)說(shuō)破壞膜和通過(guò)打破蛋白-蛋白間相互作用來(lái)變性蛋白；非變性去垢劑分為非離子比如Triton X-100，膽鹽比如膽酸鹽類(lèi)和兩性離子去垢劑比如CHAPS。
1.2 常見(jiàn)去垢劑（用于蛋白增溶）的特征
|
去垢劑 |
類(lèi)型 |
聚集數 |
膠束分子量 |
臨界膠束濃度(CMC, mM) |
臨界膠束濃度(CMC, %，w/v) |
濁點(diǎn)（℃） |
透析去除 |
|
Triton X-100 |
非離子型 |
140 |
90,000 |
0.24 |
0.0155 |
64 |
否 |
|
Triton X-114 |
非離子型 |
/ |
/ |
0.21 |
0.0113 |
23 |
否 |
|
NP-40 |
非離子型 |
149 |
90,000 |
0.29 |
0.0179 |
80 |
否 |
|
Brij-35 |
非離子型 |
40 |
49,000 |
0.09 |
0.1103 |
>100 |
否 |
|
Brij-58 |
非離子型 |
70 |
82,000 |
0.077 |
0.0086 |
>100 |
否 |
|
Tween-20 |
非離子型 |
/ |
/ |
0.06 |
0.0074 |
95 |
否 |
|
Tween-80 |
非離子型 |
60 |
76,000 |
0.012 |
0.0016 |
/ |
|
|
Octyl Glucoside |
非離子型 |
27 |
8,000 |
23-25 |
0.6716-0.7300 |
/ |
是 |
|
Octylthio Glucoside |
非離子型 |
/ |
/ |
9 |
0.2772 |
>100 |
是 |
|
SDS |
陰離子 |
62 |
18,000 |
288 |
6-8 |
0.1728-2304 |
是 |
|
CHAPS |
兩性離子 |
10 |
6,149 |
8-10 |
0.4920-0.6150 |
>100 |
是 |
|
CHAPSO |
兩性離子 |
11 |
6,940 |
8-10 |
0.5048 |
90 |
是 |
二、 幾個(gè)免疫實(shí)驗的基本概念
免疫印跡（Immunoblotting）：又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達量差異。
免疫沉淀（Immunoprecipitation）：是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白A/G或二抗偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經(jīng)過(guò)洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）：是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細胞內存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來(lái)。再通過(guò)蛋白變性分離，對B蛋白進(jìn)行檢測，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。
染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）：是一種適用于研究蛋白質(zhì)與生物體細胞中 DNA 相互作用的經(jīng)典方法，這項技術(shù)幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會(huì )出現何種組蛋白修飾 。檢測原理是當在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA 復合物，并將其隨機切斷為一定長(cháng)度范圍內的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的 DNA 片段，通過(guò)對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
