Detection and measurement of hydrogen peroxide:

過(guò)氧化氫（Hydrogen peroxide, H₂O₂）特異性熒光探針專(zhuān)題

專(zhuān)題關(guān)鍵詞：

ROSGreen^TM H2O2 Probe；BES-H2O2-Ac；hydrogen peroxide (H2O2) 過(guò)氧化氫；HYDROP-EX；Amplex Red reagent；Peroxidase 過(guò)氧化物酶；

專(zhuān)題背景：

活性氧（ROS）比如超氧陰離子（O2-.），過(guò)氧化氫（H2O2）和羥基自由基（HO .）是各種疾病病理發(fā)展中的重要調節劑。DCFH和DCFH-DA普遍用作熒光探針測定細胞來(lái)源的過(guò)氧化氫（H2O2），但這些化合物最大的缺陷在于對H2O2的選擇性極其弱。

為此，很多公司開(kāi)發(fā)特異性的過(guò)氧化氫（H2O2）探針，以闡明H2O2導致疾病相關(guān)的細胞反應和動(dòng)力學(xué)功能。

一、高選擇性過(guò)氧化氫探針（BES-H2O2-Ac，BES-H2O2，from wako chemical）

Wako chemical公司開(kāi)發(fā)兩款BES-H2O2，分別檢測細胞來(lái)源的H2O2和細胞非滲透性的H2O2，具高選擇性。

1）兩款探針作用機理如下：

2）兩款探針的應用示例：

圖：BES-H2O2檢測Jurkat T細胞的熒光成像和同一視野下的相位對比成像圖。Jurkat T細胞用含50μM BES-H2O2-Ac的培養基孵育1h。之后，其中一組細胞用含5mM 丁酸（H2O2產(chǎn)生的刺激物）的培養基處理，而另一組用正常培養基（不含H2O2產(chǎn)生的刺激物）處理，分別培養1h。（圖片來(lái)源: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences）。

3）兩款探針的訂購信息：歡迎來(lái)電咨詢(xún)021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

□     高度選擇性結合H2O2;

□     BES H2O2-Ac具細胞膜滲透性；

□     檢測細胞來(lái)源的H2O2；

□     適用于熒光成像；

二、高選擇性過(guò)氧化氫探針（ROSGreenTMH2O2 Probe過(guò)氧化氫熒光探針，from MKBio）

懋康生物（MKBio）開(kāi)發(fā)一款細胞膜滲透性的過(guò)氧化氫特異性探針：ROSGreenTMH2O2 Probe。

1）  探針描述

過(guò)氧化氫（Hydrogen peroxide, H2O2）是一種反映氧代謝副產(chǎn)物，用于許多氧化應激相關(guān)態(tài)的關(guān)鍵調節劑，參與人體大量的生理和病理活動(dòng)，比如哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、神經(jīng)性衰退疾病和唐氏綜合征等，但目前對H2O2生成、積累、運輸和功能的分子機制仍了解很少，最大的限制在于缺乏靈敏且特異性H2O2探針，用于活細胞研究。目前能得到的H2O2反應性探針的缺陷包括1）來(lái)自其他ROS比如過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO-）、過(guò)氧化基（ROO?）、超氧化物（?O2–）的背景熒光干擾；2）對外源活化酶的需求；水缺乏水溶性或不兼容于水溶體系；4）以及紫外區域的激發(fā)光譜特征等。

本ROSGreenTMH2O2Probe正是克服以上缺陷開(kāi)發(fā)的一款過(guò)氧化氫（H2O2）選擇性探針。探針本身無(wú)熒光，可見(jiàn)光區域內無(wú)吸收峰。一旦接觸H2O2，瞬間激發(fā)熒光增加并伴隨可見(jiàn)波長(cháng)吸收帶的生成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/發(fā)射熒光反應，此探針具有較大的動(dòng)力學(xué)范圍。與相似的ROS比如O2–，NO，或OCl-相比，ROSGreenTMH2O2Probe對H2O2呈現出＞100倍（100-fold）的選擇性。

2）  應用示例

圖. Costar 黑色96孔培養板內CHO-K1活細胞用ROSGreenTMH2O2Probe的染色圖。圖A：對照細胞；圖B：用H2O2（100μM）處理5min后的細胞；

3）訂購信息：歡迎來(lái)電咨詢(xún)021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

□     高度選擇性結合H2O2;

□     ROSGreenTMH2O2 Probe具細胞膜滲透性；

□     檢測溶液或細胞來(lái)源的H2O2；

□     適用于熒光成像和流式細胞分析；

三、選擇性過(guò)氧化氫探針（ADHP，Amplex®Red過(guò)氧化氫探針，from MKBio）

懋康生物（MKBio）供應的10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙?；?3,7-二羥基吩嗪，以商標名Amplex®Red在市場(chǎng)上銷(xiāo)售，是目前為止最靈敏和穩定的熒光探針用來(lái)檢測HRP和H2O2。

1）  基本描述

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙?；?3,7-二羥基吩嗪，以商標名Amplex®Red在市場(chǎng)上銷(xiāo)售。ADHP是一種高度靈敏和穩定的過(guò)氧化物酶底物，選擇性檢測過(guò)氧化氫（H2O2）。存在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的體系中，這一基本無(wú)色和非熒光的ADHP與H2O2以1：1的化學(xué)定量比反應，生成強紅色熒光的試鹵靈（Resorufin），可通過(guò)熒光光度計和酶標儀分析結果。許多酶反應能產(chǎn)生H2O2，因此，ADHP能夠用在偶聯(lián)酶促反應中檢測許多不同酶的生物活性。

2）  工作原理

圖. 使用ADHP進(jìn)行偶聯(lián)酶促反應的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成過(guò)氧化氫（H2O2），通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化ADHP反應生成強熒光試鹵靈（Resorufin）。

3）  常見(jiàn)應用

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前為止最靈敏和穩定的熒光探針用來(lái)檢測HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用來(lái)檢測許多免疫實(shí)驗中的HRP；

B）  ADHP用來(lái)檢測微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）檢測過(guò)氧化物酶活性，最少能檢測1×10?5U/mL HRP；或H2O2，最少能檢測50nM H2O2?！疚墨I來(lái)源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

4）  訂購信息：歡迎來(lái)電咨詢(xún)021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

四、過(guò)氧化氫清除劑（Hydrogen Peroxide Scavenger from MKBio）

五、過(guò)氧化氫活性檢測試劑盒（Hydrogen Peroxide assay kit）

懋康生物作為AAT bioquest在中國的授權代理商，提供該品牌的優(yōu)質(zhì)過(guò)氧化氫活性檢測試劑盒，比色法（Cat#: 11500）和熒光法（Cat#:11501），請根據實(shí)驗具體需求以及現有檢測儀器來(lái)選擇合適產(chǎn)品。

1）試劑盒特征（比色法，Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite? IR過(guò)氧化物酶底物來(lái)定量檢測溶液和細胞提取物內的過(guò)氧化氫水平。一旦過(guò)氧化氫氧化，無(wú)色的Amplite? IR產(chǎn)生強藍色產(chǎn)物，在pH 4-10范圍內不受pH影響。

測定儀器：吸光度測定酶標儀（650nm）

結果展示：

2） 試劑盒特征（熒光法，Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite? red過(guò)氧化物酶底物來(lái)定量檢測溶液和細胞提取物內的過(guò)氧化氫水平。

測定儀器：熒光酶標儀（540nm/590nm）

結果示例：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。