Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I，來(lái)源于牛胰腺

（凍干粉形式，即用型液體形式，懋康生物）

關(guān)鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I DNase I；核糖核酸酶 RNase；全能核酸酶 Benzonase；Sigma D5025； Sigma DN25；CAS：9003-98-9；

需求背景：

分子生物學(xué)實(shí)驗中，在RNA樣品的制備過(guò)程中，常常會(huì )受到樣品中不可避免存在的DNA的干擾，為了保證RNA樣品的純度以及滿(mǎn)足后續RNA相關(guān)研究的順利開(kāi)展，需要DNase I有針對性的酶解DNA。另外，在蛋白制品的生產(chǎn)中比如抗體，重組蛋白，細胞裂解這步釋放的內含物中除掉蛋白外，往往有很高含量的核酸（DNA, RNA），核酸的存在嚴重干擾制品的純化和活性，為此，利用DNase I和RNase組合方式來(lái)去除核酸干擾，也很必要。還有，在其他的實(shí)驗比如TUNEL細胞凋亡檢測中常用DNase I對細胞樣本核酸進(jìn)行剪切，以得到實(shí)驗所需的陽(yáng)性對照。

基本介紹：

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫(xiě)DNase I，在大多數細胞和組織中都能發(fā)現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸（見(jiàn)下圖反應流程圖），平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫(xiě)DNase I，最早從胰腺中分離而來(lái)，至今哺乳動(dòng)物胰腺也是最主要的來(lái)源之一。DNase I以?xún)蓪Χ蜴I結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴(lài)于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來(lái)的1/2。

主要應用：

◇   制備不含DNA的RNA樣本；

◇   RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；

◇   DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；

◇   缺口平移法標記探針用；

◇   制備隨機DNA片段文庫；

◇   TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽(yáng)性對照；

我司（懋康生物MKBio）提供的脫氧核糖核酸酶I（DNase I），來(lái)源于牛胰腺，通過(guò)親和色譜純化所得，不含RNase和蛋白酶污染。為了滿(mǎn)足工業(yè)用戶(hù)和科研用戶(hù)的不同應用需求，我們提供凍干粉（不同比活）和即用型液體形式的DNase I。具體信息如下：

一、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍干粉形式，比活力≥2000 Kunit U/mg protein）

1.1 產(chǎn)品特征：

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   蛋白純度：≥80%（biuret），色譜純化

3）   比活力：≥2000Kunit Units/mg protein

4）   活力定義：25℃，pH5.0條件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個(gè)酶活力單位（Kunitz unit）。

5）   激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6）   抑制劑：β-巰基乙醇；螯合劑；SDS；肌動(dòng)蛋白；并沒(méi)有特異性抑制DNase I酶活的通用抑制劑，比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影響Mn2+激活的DNase I。

7）   溶解性：溶于0.15M NaCl（5mg/ml），無(wú)色透明溶液

1.2 訂購信息：產(chǎn)品性能媲美Sigma D5025，本品生產(chǎn)至少十年以上，銷(xiāo)售到國內各大實(shí)驗室，歡迎各大工業(yè)和科研用戶(hù)前來(lái)咨詢(xún)。電話(huà)：021-54736159，QQ：2971634497。

二、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍干粉形式，比活力≥500 Kunit U/mg protein）

2.1 產(chǎn)品特征：

8）   CAS NO：9003-98-9

9）   分子量：~31 kDa

10）同義名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶，脫氧核糖核酸酶A

11）  比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

12）  活力定義：在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應緩沖體系中，37℃，10min內完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即為一個(gè)活力單位。此反應條件下得到的一個(gè)單位DNase活力約等于一個(gè)Kuntiz unit。

13）  激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14）  抑制劑：EGTA，EDTA，鹽離子濃度（＞100mM）都能降低DNase活性

15）  熱失活：含終止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）內65℃，處理10min

16）  溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

2.2 訂購信息：產(chǎn)品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401（≥2,000 Kunit U/mg protein），價(jià)格更加經(jīng)濟。歡迎咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159，QQ：2971634497。

三、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（即用型溶液）

3.1 產(chǎn)品特征：

試劑盒形式提供，其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供，酶經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控能極好的消化模板；還提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution，節省了試劑配制的時(shí)間，用起來(lái)更加快捷。

3.2 試劑盒包裝：

3.3 使用方法【以RT-PCR反應前RNA樣本內DNA污染的去除為例】

1）DNA模板經(jīng)核酸內切酶線(xiàn)性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量無(wú)菌去離子水中。

2）往一個(gè)RNase-free EP管內依次加入下列試劑：

【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放大上述反應體系。條件許可下最好往體系內加入適量RNase抑制劑（貨號：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

3）   37℃孵育30min。

4） 往上述體系內加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×，混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活?！咀⒁狻浚阂欢ㄒ燃尤?0× Stop Solution，然后再加熱失活RNase I，否則先加熱可能引起RNA被降解。

5）加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模板。

3.4  訂購信息：即用型試劑盒，科研單位且用量不多用戶(hù)的首選。歡迎咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159，QQ：2971634497。

相關(guān)產(chǎn)品

貨號	名稱(chēng)	規格
MF0402-10MG	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein	10MG
MF0401-15KU	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein	15KU
MF0405-200U	DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液	200U
MF0203-100MG	Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas	100mg
MP1509-25KU	Benzonase Nuclease 全能核酸酶	25KU
MF0201-100MG	Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K	100mg
MF0218-2KU	RNase Inhibitor (40U/μl), Murine小鼠RNA酶抑制劑	2KU
MF0404-500ML	DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水（無(wú)DNase、RNase )	500ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。