核酸/蛋白提取重要工具酶：

脫氧核糖核酸酶I，核糖核酸酶A，全能核酸酶

（DNase I，RNase A，Benzonase）

搜索關(guān)鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I（DNase I），Sigma D5025，核糖核酸酶A（RNase A）,全能核酸酶（Benzonase）,Merck 70746-3；CAS：9001-99-4；蛋白酶K（Protease K）；

背景需求：

分子生物學(xué)實(shí)驗中，要想研究核酸（DNA, RNA）的各種功能、表達和群落分布等相關(guān)研究，首先要做的第一步就是核酸制備。核酸制備的第一步就是細胞內含物（細胞核，細胞漿）的釋放，由于DNA和RNA經(jīng)常會(huì )裂解的過(guò)程中共同釋放出來(lái)，不管采用任何強烈程度的提取液都無(wú)法避免兩者的干擾，為此，需要采用特異性的酶來(lái)去除干擾，保證任一核酸類(lèi)型的純度。要提取高質(zhì)量的DNA，需要用RNase A來(lái)消化樣品中殘留的RNA；要提取高質(zhì)量的RNA，需要用DNase I來(lái)消化樣品中殘留的基因組DNA等。

蛋白研究中，尤其是重組蛋白（比如生物制品重組單克隆抗體，重組功能蛋白，甚至是疫苗）的制備中，對蛋白的純度要求很高，而蛋白提取的第一步同樣是對細胞內含物的釋放，此時(shí)隨著(zhù)而來(lái)的問(wèn)題就是要盡量去除核酸的干擾，此時(shí)既有DNA又有RNA的干擾，傳統方法選擇DNase+RNase組合的酶消化或超聲方法來(lái)破壞RNA，這兩種方法都存在不少的缺點(diǎn)，而全能核酸酶（Benzonase）的出現，讓這一步變得很簡(jiǎn)單。一種酶即可輕松去除任何核酸類(lèi)型的干擾。

我司（懋康MKBio）生物根據科研工作者和工業(yè)用戶(hù)的需求，生產(chǎn)和供應幾種應用率很高的酶制品，產(chǎn)品品質(zhì)高，且能有大規格供應，歡迎咨詢(xún)。

Part 1. 脫氧核糖核酸酶I (DNase I, CAS：9003-98-9)

常見(jiàn)同義名：

DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A脫氧核糖核酸5′-寡核苷酸水解酶，脫氧核糖核酸酶A

CAS NO.：9003-98-9

來(lái)源：牛胰腺Bovine Pancreas

分子量：~31kDa

特異性（目的）：水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）

基本描述：

脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I），在大多數細胞和組織中都能發(fā)現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸（見(jiàn)下圖反應流程圖1），平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。

圖1. 脫氧核酸糖酸酶I(DNase I)作用機理圖

主要應用：

• 制備不含DNA的RNA樣本；

• RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；

• T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；

• DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；

• 缺口平移法標記探針用；

• 制備隨機DNA片段文庫；

• TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽(yáng)性對照；

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【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生物整理的Deoxyribonuclease I (DNase I)脫氧核糖核酸酶I，來(lái)源于牛胰腺產(chǎn)品專(zhuān)題。

Part 2. 蛋白酶K (Proteinase K, CAS：39450-01-6)

常見(jiàn)同義名：

Proteinase K (from Tritirachium album)蛋白酶K（林伯氏白色念球菌）；Endopeptidase K肽鏈內切酶K；

CAS NO.：39450-01-6

來(lái)源：基因來(lái)源林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)，酵母重組表達

分子量：~29.3kDa

特異性（目的）：切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品內蛋白質(zhì)的降解，常用于核酸制品中核酸酶（Nuclease）的去除，能降解天然蛋白和變性蛋白。

基本描述：

蛋白酶K（Proteinase K），一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶，pH 4-12的寬廣范圍內均有活性，SDS、尿素或EDTA存在條件下也很穩定。相對分子量約29.3kDa，能夠切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品內蛋白質(zhì)的降解。對天然和變性蛋白都表現出廣譜的切割特異性，廣泛用于DNA和RNA的純化實(shí)驗。

主要應用：

• 對酵母菌、細菌、組織裂解液或哺乳動(dòng)物細胞裂解液中污染蛋白的降解來(lái)改善核酸的提取質(zhì)量和產(chǎn)量；

• 對樣本材料內酶比如DNase，RNase的失活來(lái)改善高分子量核酸的提取質(zhì)量和產(chǎn)量；

• 膜結合蛋白定位和定向用的拓撲探針；

• 改善PCR克隆效率；

• 核酸酶保護實(shí)驗中失活酶混合物；

• 去除結合到陽(yáng)離子蛋白如溶菌酶和核酸酶A上的內毒素；

• 對石蠟包埋組織的處理以暴露抗原表位用于抗體標記用；

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Part 3. 核糖核酸酶A (RNase A, CAS：9001-99-4)

常見(jiàn)同義名：

Ribonuclease I核糖核酸酶I；Pancreatic Ribonuclease胰腺核酸酶；Endoribonuclease I內源核糖核酸酶I；Ribonucleate 3′-pyrimidinooligonucleotidohydrolase核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水解酶；

CAS NO.：9001-99-4

來(lái)源：Bovine Pancreas牛胰腺

分子量：~13.7kDa

特異性（目的）：低鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。高鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

基本描述：

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，縮寫(xiě)RNase A，CAS NO：9001-99-4，一種核糖核酸內切酶（endoribonuclease），特異性識別嘧啶類(lèi)核苷酸3’-核糖磷酸基團（作用機理見(jiàn)圖2），如序列pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)切割產(chǎn)生pG-pG-pCp和A-PG，當切割單鏈RNA時(shí)活性最高，推薦工作濃度為1-100μg/ml，兼容于各種反應體系。低鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。高鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。RNase A不會(huì )水解DNA，因DNA缺少形成環(huán)形中間體必需的2’-OH。

主要應用：

• RNase保護實(shí)驗（RNase protection assays）；

• 去除非特異性的結合RNA（bound RNA）；

• RNA序列分析；

• 蛋白樣品中含有的RNA污染降解；

• DNA純化；

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相關(guān)產(chǎn)品：

【備注】：核糖核酸酶H (RNase H)：特異性分解RNA-DNA雜交體中的RNA鏈的一種核糖核酸內切酶，不能消化單鏈或雙鏈DNA。

Part 4. 全能核酸酶/廣譜核酸酶 (Benzonase, CAS：9025-65-4)

常見(jiàn)同義名：

Benzonase endonuclease；Benzonase Nuclease；BenzNuclease; Universal Nuclease; Turbonuclease;全能核酸酶；廣譜核酸酶；

CAS NO.：9025-65-4

來(lái)源：基因來(lái)自粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱(chēng)為靈桿菌）；酵母重組表達；

分子量：~27.9kDa

特異性（目的）：可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線(xiàn)性，環(huán)狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。

基本描述：

Benzonase，中文名全能核酸酶，或廣譜核酸酶，一種源于粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱(chēng)為靈桿菌）的非特異性核酸內切酶，由兩個(gè)完全一樣的亞基構成，每個(gè)亞基大約30kDa，含有245個(gè)氨基酸和兩個(gè)必需的二硫鍵?？梢郧懈詈徒到飧鞣N形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線(xiàn)性，環(huán)狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效（反應機制見(jiàn)圖3）。對核酸堿基序列無(wú)特異性要求，可在鏈內任意核苷酸間進(jìn)行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

主要應用：

• 科研研究中，作為培養細胞上清和細胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸干擾提高后續蛋白純化或功能研究；

• 用在生化分析樣品制備——ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過(guò)程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，以及提高回收率。

• 疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類(lèi)制藥工業(yè)，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白類(lèi)核酸污染顯著(zhù)降低至皮克級別，提供生物功效。

• 防止細胞凝聚（Cell clumping），特別是融化凍存的細胞樣品時(shí)；

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【溫馨提示】具體信息見(jiàn)懋康網(wǎng)站全能核酸酶精品介紹（含常見(jiàn)問(wèn)題和使用方法）。

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